第03章-基因的转移和重组.docVIP

第三章 基因的转移和重组 43 - 第三章 基因的转移和重组 自然界的基因转移和重组是基因变异和物种进化的基础，也在繁殖、病毒感染、基因表达以及癌基因激活等过程中起重要的作用。人们正是对自然界基因转移和重组的认识，才发展起DNA重组技术。 第一节 基因的转移 细菌的接合 （一）概念：细菌细胞通过相互接触使遗传信息从供体细胞单向转移到受体细胞的过程。 在发现接合以前，人们就对细菌的杂交进行探索，但存在两大难题不易解决。 1. a＋b－ × a－b＋ 杂交后得到的重组子频率很低，和基因回复突变的频率相接近。难以确定a＋b＋是由于a＋b－ 或a－b＋ 亲本回复突变而产生，还是真正的重组产物。 2.现已知道细菌重组频率低于10－6 ，观察百万个菌落以上才可能出现一个重组菌落，对于当时用形态特征作为研究对象来说，工作量太大。 （二）实验证据 1、1946年，莱德伯格（Lederberg）和塔特姆（Tatum）的多重营养缺陷型菌杂交实验。 2、1950年,戴维(Davis,B.D.)U型管实验 （三）遗传物质的单向转移 1953年，海斯（Hayes，W）在重复莱德伯格和塔特姆的杂交实验之前，先用高剂量的链霉素处理A菌株，结果A菌株受处理后杂交结果不受影响，而B菌株受处理后却完全阻止了重组的发生。这意味两个菌株在杂交过程中的作用是不同的，可能不是交互的过程。 因为链霉素可以阻止细胞分裂，继而杀死细胞，但它还可以让杂交持续一个短时间，A菌株在杂交后被杀死，但并不影响杂交结果，表明它是一种供体，像雄性动物一样，交配后被杀死不影响后代。而B菌株像是一种受体，和雌性动物一样，受孕后被杀死的话，就不会产生后代。海斯的结论认为细菌在接合过程中,两个亲本在杂交中所起作用不同,有供体和受体之分,相当于”雄性”和”雌性” （四）F因子的发现 海斯将放入冰箱一年之久的一个菌种 A（strs ）和B（ strs ）进行杂交，A菌株是推测的雄性，B菌株是推测的雌性，结果和预期不同，不能产生重组子。 他将A菌种进行诱变，使其由strs 变成strr，以便试着和另一品系A（ strs ）杂交，结果是可育的，说明原来的雄性A菌株放在冰箱内一年变成了雌性，即从供体变成了受体。以上实验完成不久，莱德博格和她的妻子也发现了这一现象。 他们对此的一致解释是，所谓的供体或雄性是细菌的细胞内有一种致育因子（fertility factor，F)， F＋表示，而雌性品系缺乏这种F因子，以F－表示。 原先的F＋品系(A)放置冰箱一年后丢失的F因子，变成了F－，作为F－的A品系不能和另一F－的B品系杂交，所以不育。丢失F因子的A菌株经诱变后其基因型由strs变为strr ，但仍为F－，作为F－的A菌株可与另一品系的F＋的A（ strs)杂交，经strr选择培养基筛选出的重组子仍是F＋(strr) ，获得的重组子和F－的（ strs ）杂交仍然可育，这样便发现了F因子。 F因子存在的细菌为F＋，F因子丧失的细菌为F－，F＋细胞分裂后仍为F＋,在这一点上F＋类似于染色体基因。但F并不是染色体基因，因为染色体基因不那么容易消失，且染色体基因的转移频率不超过10－6，而F因子的转移频率很高。所以F因子是染色体外的遗传结构，即质粒。 （五）F因子的特性 高频重组菌（high frequency recombination，Hfr）：从F+菌株中可以得到重组频率高于F+菌株1000倍的菌株,是由F因子通过同源重组整合到宿主染色体上形成的。 1.F＋和F－能杂交，Hfr和F－菌株能接合，F－和F－不能接合。 2.F＋和Hfr细胞表面有性菌毛，F－细胞表面没有性菌毛，性菌毛与细菌接合有关。 3.Hfr菌与F－菌接合后F－很少变为F＋，F＋与F－接合后，F－常变为F＋。 4.Hfr细菌经吖啶橙处理后，性质不变，F＋经吖啶橙处理后变为F－。 （六）F因子的遗传结构 F因子是一种质粒,为环状闭合双涟DNA，长度为94.5kb，是大肠杆菌基因组的2％，其中1/3的基因与接合有关。F质粒可在细胞内游离，也可以整合到宿主染色体内。整个基因组包括：转移区、复制区、插入区 转移区由23个基因组成，构成tra操纵子。 转移区 由23个基因组成，构成tra操纵子。 这些基因分别与性菌毛的形成，转移因子的转移，杂交对的配对，转移的起始有关。 转移的起始区为oriT，供体F质粒的转移从oriT开始。 复制区 复制区负责质粒的自我复制。 F质粒的自主复制区中包含复制的起点。 F质粒的复制是按θ型方式双向复制。 插入区 F质粒的插入区包含4个插入顺序：2个IS3，1个IS2和1个Tn1000。通过和宿主染色体上的IS同源重组或通过转座，F因子可以整合到宿主染色体不同位点上。 与质粒的整合、切除、分离有关