植物组织培养技术任务四 脱毒技术.ppt

§1 脱毒方法 三、热处理法（二）脱毒方法 1、温汤浸渍处理脱毒法 材料置于50℃左右热水中浸渍几十分钟到数小时。 特点：简单易行，成本低，但易使材料受伤。适用：甘蔗、木本植物和休眠器官的处理。  2、热空气处理脱毒法 将植物用35～40℃的热空气处理2～4周或更长时间。特点：损伤较小，操作简便，须严格控制温度时间适用：多数植物 3、热处理结合茎尖培养脱毒 目前常采用将热处理和茎尖分生组织培养结合起来的方法脱毒。 特点：既可缩短热处理时间，提高植株成活率，又可剥离较大的茎尖，提高茎尖培养的成活率和脱毒率。 适用：大多数植物，并可除去一般培养难以去除的纺锤块茎类病毒 §1 脱毒方法 四、其他方法（一）愈伤组织培养脱毒 将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织，再诱导愈伤组织分化成苗，从而获得无病害毒植株的方法，即愈伤组织培养脱毒法。 部分愈伤组织细胞不带病毒可能有以下两方面的原因：一是愈伤组织细胞分裂增殖速度快，而病毒复制速度较慢，赶不上细胞的繁殖；二是愈伤组织发生了抗病毒突变。 §1 脱毒方法 四、其他方法（二）珠心胚培养脱毒 柑橘类种子为多胚种子，除具有合子胚外还有珠心胚，种子一般不带病毒，因此珠心胚植株不易带病毒。（三）微尖嫁接脱毒 指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖（0.14-1.0mm,带3-4个叶原基），以培养脱毒苗的技术。脱毒程序：无菌砧木培养——茎尖准备——嫁接——嫁接苗培养——移植。 主要内容 脱毒方法 1 脱毒苗鉴定 2 无病毒苗的保存和繁殖 3 §2 脱毒苗鉴定 一、直接检查法 直接观察待侧植株生长状态是否异常，茎叶上有无特定病毒引起的可见症状，从而可判断病毒是否存在。二、指示植物法 将一些对病毒反映敏感，症状特征显著的植物作为指示植物，用以检验待测植物体内特定病毒的存在。即指示植物法。 特点：条件简单，操作方便，经济而有效，只能测出病毒的相对感染力。 指示植物法 一些常见病毒病引起的可见病症 症状 病毒病名称 症状 病毒名称 褪绿、黄化 小麦黄矮病 斑点 十字花科黑斑病 花叶、斑驳 烟草花叶病、菜豆花叶病、黄瓜花叶病 猝倒、立枯 棉花立枯病、瓜苗猝倒病、水稻烂秧病 溃疡 杨树溃疡病、柑桔溃疡病，番茄溃疡病 萎蔫 棉花枯萎病、茄科植物青枯病 枯死 马铃薯晚疫病、水稻白叶枯病 矮化 玉米矮化病、泡桐丛枝病、小麦丛矮病 穿孔 桃细菌性穿孔病 徒长 水稻恶苗病 疮痂 柑桔疮痂病、梨黑星病、马铃薯疮痂病 卷叶 马铃薯卷叶病 几种马铃薯病毒的指示植物及表现症状 病毒种类 指示植物 表现症状 马铃薯X病毒（PVX） 千红日、曼陀罗、辣椒、心叶烟 脉间花叶 马铃薯S病毒（PVS） 苋色藜、千日红、曼陀罗、昆诺阿藜 叶脉深陷，粗缩 马铃薯Y病毒（PVY） 野生马铃薯、洋酸菜、曼陀罗 随品种而异，有些轻微花叶或粗缩，敏感品种反应为坏死 马铃薯卷叶病毒（PLRV） 洋酸菜 叶尖呈浅黄色，有些品种呈紫色或红色 §2 脱毒苗鉴定 （一）草本植物鉴定 1、汁叶涂抹法 被鉴定植物取1～3克幼叶—加10毫升水及少量磷酸缓冲液-研碎过滤-加金钢砂作麾擦剂-汁液在叶面上涂抹2～3次接种 2、小叶嫁接法 指示植物作砧木，被鉴定植物小叶作接穗，常用劈接法。 （二）木本指示植物鉴定 1、直接在指示植物上嫁接待检植株的芽片 2、双重芽嫁接 3、双芽嫁接法 部分病毒的木本指示植物及相应症状 病毒种类 木本指示植物 表现症状 苹果褪绿叶斑病毒 苏俄苹果 叶片出现褪绿斑点，叶小，植株矮化，长势弱 苹果茎痘病毒 司派227或光辉 叶片反卷，植株矮化，皮层坏死 苹果茎沟病毒 弗吉尼亚小苹果 植株矮小，接合部内有深褐色坏死环纹，木质部产生深褐色纵向条沟 苹果花叶病毒 兰蓬王、红玉和金冠 叶片上产生黄斑、沿叶脉条斑 苹果锈果类病毒 国光 叶和茎干锈斑、坏死斑 葡萄扇叶病毒 葡萄茎痘病毒 沙地葡萄圣乔治 叶片出现褪绿斑点、线纹斑及环斑、局部坏死、畸形；叶脉间出现星状透明斑 葡萄卷叶病毒 欧亚种葡萄 叶片下卷、叶脉间变红 葡萄茎沟病毒 Kober 5BB 仅在Kober5BB上会产生茎沟 葡萄栓皮病毒 LN33 节间肿大，部分叶片背面出现栓皮 葡萄金黄病毒 Baco 22A 植株矮化，叶片下卷、黄化 葡萄脉坏死病 110R 叶片背面沿叶脉出现坏死斑，卷须和嫩梢坏死 葡萄脉斑驳病 河岸葡萄 褪绿斑，沿脉斑驳，叶片畸形 柑橘碎叶病 腊斯克枳橙、特洛亚枳橙、卡里佐枳橙和厚皮来檬 新叶上出现叶片扭曲，叶缘残缺呈破碎状 §2 脱毒苗鉴定 三、抗血清鉴定法特异性高，测定速度快，几小时甚至几分钟就可以完成。植