大肠杆菌表达系统使用指导.pptVIP

（二）融合蛋白技术的内容;3.将重组表达载体转染宿主细胞并利用选择标志进行筛选及测序。 4.融合基因的诱导表达及表达蛋白的纯化 。 ; 一般来说， 3-5 个氨基酸的Linker 可满足大部分融合蛋白的正确折叠的要求。 有人尝试在融合蛋白间加入一段有疏水性和一定伸展性的较长肽链，如(Gly4Ser1)，目的是将两者分开，以缓解相互干扰作用， 并获得了满意的结果。 但具体涉及到每种蛋白时，需具体分析。当我们构建融合蛋白时，应多选择几种融合方式， 从中优化出理想的连接方式。 另外，大量研究表明连接肽的柔性和疏水性对不扰乱蛋白质的功能结构域是十分重要的。 ;常用的融合蛋白的载体有人血清白蛋白( Huma serum albumin， HSA) 融合蛋白、 β-半乳糖苷酶融合蛋白、 谷胱甘肽 S-转移酶(GST) 融合蛋白以及硫氧还蛋白(Trx) 融合蛋白等。 而人血清白蛋白( HSA) 则由于本身特殊的优点??? 更适合于充当长效融合蛋白类 药物的融合载体。 HSA是包含585个氨基酸残基的单链无糖基化的球形蛋白质， 分子量65kD。它是人血浆中含量最高的单一蛋白质(达40g/L)， 在体内有维持血液渗透压， 运输营养和其它重要生物物质的作用。HSA本身是许多内源因子和外源药物的载体。药物和血清白蛋白结合后。可以减少其生物利用度， 增加在体内的半衰期至19d之久。 ;