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第五章? 神经营养因子 第一节? 神经营养因子的生物学基础 一、神经营养因子的发现与发展历史 1、定义 一般将神经营养物质(neurotrophins)和对神经细胞存活具有调节作用的生长因子统称为神经营养因子(neurotrophic factors, NTFs)。 2、发现与发展历史 50年前神经生长因子(nerve growth factor，NGF)的发现开辟了肽类生长因子的纪元。具有神经元特异性的NGF成为第一个被发现的细胞生长因子，也是最典型的神经营养因子。二十世纪五十年代初，Levi-Montalcini利用鸡胚背根节组织培养技术建立了检测该活性分子生物活性的经典方法(图5-1)。不久她又和Cohen一起相继找到了两种富含这种物质的生物材料——蛇毒和小鼠颌下腺。1959和1960年先后从中分离纯化出这种促神经生长的、可溶性蛋白质，之后命名为神经生长因子(NGF)。NGF的发现使人们认识到，在神经系统的发生过程中，需要一些能促进神经元发育、生长和维持其活性的因子，由此开辟了神经生物学的新领域，Levi-Montalcini和Cohen也因此获得了1986年度诺贝尔生理学奖。 ? ? 　 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 　 图1神经生长因子(NGF)的神经营养活性 左侧未加NGF的鸡胚背根节，右侧加入NGF的鸡胚背根节，可观察到NGF的促进突起生长的作用。 由于NGF只选择性地对几类神经细胞有作用，人们推测还有其它类型的神经营养因子存在。近二十年来又陆续发现九种新的神经营养因子。1982年Barde等从脑中分离到脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)。1989年，BDNF的基因被克隆。1990年，根据BDNF和NGF中保守性最强部分的序列，利用PCR等技术，几个实验室几乎同时发现了NGF基因家族的第三个成员，如脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor)、神经营养素-3(neurotrophin-3 NT-3)、神经营养物质－4/5(neurotrophin-4／5，NT4／5)、神经营养素-6(neurotrophin-6，NT-6)、睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor，CNTF)和胶质细胞源性神营养因子(glia cell line-derived neurotrophic factor，GDNF)。由于它们的氨基酸序列相似，因此统称为NGF家族或神经营养因子(neurotrophic factors，NTFs)”。?? 二、神经营养因子的分子特点 神经营养因子主要包括NGF，BDNF，NT-3，NT-4/5等。作为同一家族的成员，它们的基因结构十分相似，都起源于同一基因家族。 图? 5-2 大鼠NGF，BDNF，NT-3氨基酸序列及可变区（方框内） 从测序后推导的氨基酸序列来看，它们都有较大的前体，它们成熟活性多肽的氨基酸序列分为保守区和可变区，这些区域可能与它们的功能有关。它们的活性形式均为二聚体，氨基酸序列同源性大于50%(图5-2)。它们成熟活生多肽的等电点均大于9.0，人NGF，BDNF，NT-3和NT-4/5分别由120，119，119和130个氨基酸组成(表5-1)。 ? 表5-1? 神经营养因子的理化性质 ? 等电点 前体氨基酸数 活性蛋白 氨基酸数 分子量(kDa) N-端糖 基化位点 二硫键数 NGF(人) 10 241 120 26 3 3 NGF(小鼠) 10 241／370／313 118 26 3 3 BDNF(人) 9. 99 247 119 27 0 3 BDNF(小鼠) 9. 99 249 119 27 0 3 NT-3(人) 9. 5 257 119 27 0 3 NT-3(小鼠) 9. 5 258 119 27 0 3 NT-4(人) ? 210 130 14 0 3 NT-4(小鼠) ? 209 130 14 0 3 ? 第 二 节? 神经营养因子受体 一、神经营养因子受体的种类 NTs通过与两种类型细胞表面受体，即TrK酪氨酸激酶和p75NT受体(p75NTR)相结合来调控神经元的活存、分化、生长和凋亡。这些受体通常共存于同一细胞上，调节神经元对NTs的反应。NT受体的功能从发育的神经系统可塑性到损伤神经元的活存和再生极为重要。Trk受体介导正向信号如促进生长和活存，p75NTR则介导正向和反向信号。两类受体发出的信号相互间或一致或对立。NT信号转导的关键问题是两种NT受体在一起如何调节细胞对NTs的反应以及这些受体在行使其作用时所采用的胞内信号的性质。近年来，促进NT作用的一些新的受体胞内信号蛋白