免疫荧光技术在某些皮肤病中的应用.ppt

几种大疱性皮肤病的鉴别诊断 1、BP与EBA鉴别： （1） 临床特征 （2）免疫电镜和免疫印迹 （3）盐分离皮肤法：①盐分离正常皮肤作底物，IIF，EBA抗体与真皮侧起反应，BP抗体与表皮侧起反应。 ② 盐分离损害周围皮肤，DIF 2、BP与HG鉴别： BP，70%IIF可查到IgG抗基底膜循环抗体，而大多数HG病人查不到循环抗体，HG病人血清含补体结合的循环抗BMZ抗体（又称HG因子），用IIF很难检出。 3、线状IgA大疱性皮肤病 与DH鉴别： 线状IgA大疱性皮肤病，DIF检查基底膜处IgA线状沉积，循环抗体为IgA，而DH是真皮乳头颗粒状IgA沉积。 大疱性皮肤病抗体沉积部位超微结构图 图1、正常表皮基底膜超微结构 图2、表皮基底膜显示自身抗体结合部位的超微结构 图3、 大疱性皮肤病自身抗体沉积部位及抗原分子量 图4、寻常型天疱疮(DIF) 图5、寻常型天疱疮(IIF) 图6、IgA天疱疮(DIF) 图7、大疱性类天疱疮(DIF) IgG沉积 图8、大疱性类天疱疮(DIF) C3沉积 图9、线状IgA大疱性皮肤病(DIF) IgA沉积 图10、获得性大疱性表皮松懈症盐分离正常皮肤(IIF) IgG沉积在真皮侧 图11、大疱性类天疱疮盐分离正常皮肤(IIF) IgG沉积在表皮侧 图12、红斑狼疮(DIF) IgM带状沉积 少见大疱性皮肤病例介绍 例1 患者 女 43岁，干部 口腔溃疡，疼痛3个月。 口腔双侧颊粘膜后侧及舌左侧缘表浅溃疡，左侧颊粘膜溃疡约0.5×0.3cm，未见水疱。 图13 图14 图15 例2 患者 男 21岁 农民 主诉：全身反复起水疱3年，复发加重1个月 现病史：3年前双足起水疱，易破溃，3天后泛发全身，用激素治疗后消退，但停药后复发，反复治疗达2年余，至5个月前停药，又复发，收入院治疗。 皮肤科检查：四肢躯干广泛密集分布豆大丘疹，水疱，疱壁紧张，尼氏征（-），头皮散在淡红色斑块，躯干散在大小不一淡白色斑片，口腔粘膜（-）。 病理检查：表皮下水疱，疱底真皮浅层散在嗜酸性粒细胞。胶原纤维水肿，血管扩张。 DIF 表皮基底膜IgG、C3强阳性沉积，IgM、IgA弱阳性。 图16 图17 图18 图19 图20 图21 图22 免疫荧光技术在某些皮肤病中的 应 用 概 述 抗原与相应的抗体接触后，立即结合而形成不易分离的抗原抗体复合物。在结合之前，先使抗体（或抗原）与某些显色剂偶联，则形成的抗原抗体复合物由不可见成为可见，从而可以确定组织中是否存在某种抗原（或抗体），这就是免疫病理技术的基本原理。根据抗体（或抗原）标记物的不同分为免疫荧光技术和免疫酶标技术。 免疫荧光技术的发展 · 1941年 由Coons首先建立了免疫荧光技术 · 1961年 由Kaskin首先将该技术应用到皮肤科 · 1963年 Burnham等报告了红斑狼疮病人表皮、 真皮间基底膜IgG、C3沉积 · 1964年 Beutner和Jordon利用免疫荧光技术研究天疱疮 · 1967年 区分出大疱性类天疱疮 · 70年代开始应用免疫电镜去认识大疱性皮肤病 近来，皮肤病理工作者应用免疫荧光技术对大疱性皮肤病、红斑狼疮、扁平苔癣、银屑病、皮肤血管炎等免疫病理特征进行了研究，并已广泛应用于常规病理诊断、鉴别诊断及指导治疗。 缺点： （1）标记的荧光极易褪色，不能长久保存。 （2）影响荧光强度的因素很多，而且判断阳性荧光与非特异性荧光有一定的主观性。 （3）阳性荧光细胞无法与常规石腊切片对照观察，组织学定位困难。 （4）需要较好的冰冻切片机和荧光显微镜等，因此它的应用受到一定的限制。 免疫荧光技术 （一）原理： 将荧光色素（异硫氰酸荧光素）与特异性抗体以化学的方法结合起来，即为荧光抗体，再用这种荧光抗体作为一种试剂，在特定的条件下浸染标本，与标本中相应的抗原结合。在组织中形成含有荧光标记的抗体—抗原复合物，再用荧光显微镜观察标本。 （二）方法： 1、直接法（DIF）：用荧光素标记的特 异性抗体来检查未知抗原。如组织中存有相 应的抗原，便结合，形成复合物。 抗原 标记抗体 玻片