免疫细胞功能检测技术讲义.ppt

(一) 细胞运动功能——趋化功能检测 1.原理： 2. 方法学： 琼脂糖平板法 滤膜渗透法（Boyden 小室法） (二)吞噬和杀菌功能测定 1．显微镜检查法： 2. 溶菌法 3．NBT还原试验 二、巨噬细胞功能检测 (一)炭粒廓清试验 正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)，间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。 (二)吞噬功能检测 巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨噬细胞。 (三)巨噬细胞溶酶体酶的测定 1．酸性磷酸酶的测定 硝酸铅法 偶氮法 2．非特异性酯酶的测定 常用α-萘醋酸法 (四) 细胞毒作用测定 用IFN-γ激活小鼠巨噬细胞，观察其对125I-UdR标记的DBA/2小鼠肥大细胞瘤P815的杀伤活性。 (五) 巨噬细胞促凝血活性测定 激活的巨噬细胞可产生一种与膜结合的凝血活性因子，加速正常血浆的凝固，为此取已经37℃预温的正常兔血浆和CaCl2混合液，加入经粘附有单层巨噬细胞的试管中，移置37℃，即时记录血浆凝固时间。 反映机体免疫功能状态。 肿瘤、免疫缺陷病等疾病的诊断和疾病预后监测。 组织器官移植后对受者的细胞免疫学功能监测则有利于排斥反应的早期发现，以便及时采取有效措施。 第三节 免疫细胞功能检测的临床应用 思考题 T细胞功能检测内容有哪些？ 什么是T细胞增殖试验的原理、刺激物及方法学？ 何谓T细胞介导的细胞毒试验的原理和方法学？ 何谓结核菌素皮肤试验？ B细胞功能检测的方法学有哪些？ 何谓溶血空斑试验的原理和方法学？ NK细胞活性测定的方法学有哪些？ 中性粒细胞功能检测方法学及相应原理。 巨噬细胞功能检测方法学及相应原理。 免疫细胞功能检测的临床应用有哪些？ 小 结 免疫细胞功能试验包括体内和体外试验。免疫细胞功能体外试验主要根据免疫细胞的增殖活性、分泌活性和杀伤活性等特性而进行实验设计。 具体免疫细胞功能检测内容包括：①淋巴细胞功能检测，包括T细胞增殖试验、T细胞分泌功能测定、T细胞介导的细胞毒试验以及体内试验；B细胞增殖试验、溶血空斑试验、酶联免疫斑点法以及体内试验；NK细胞活性检测方法：酶释放法、放射性核素释放法、化学发光法、流式细胞术法等。②吞噬细胞功能检测，方法有趋化功能检测、吞噬和杀菌功能测定等。 * 免疫细胞功能检测技术 第一节 淋巴细胞的功能检测 一、T细胞功能检测 二、B细胞功能检测 三、NK细胞活性测定 第二节 吞噬细胞功能检测技术 一、中性粒细胞功能检测 二、巨噬细胞功能检测 第三节 免疫细胞功能检测的临床应用 思考题 小 结 对淋巴细胞群，中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞等功能测定可以有效评价机体特异性和非特异性免疫功能。 第一节 淋巴细胞的功能检测 淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外实验。体内实验主要是间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应；体外实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定 淋巴细胞 T细胞（负责细胞免疫功能） B细胞（执行体液免疫功能） NK和K细胞（非特异性免疫作用） 一、T细胞功能的检测 T细胞增殖试验 T细胞分泌功能测定 T细胞介导的细胞毒试验 体内试验 （一）T淋巴细胞增殖试验 1. 原理： 淋巴细胞 DNA合成 分化 母细胞 刺激物 细胞变大 细胞浆扩大 空泡 核仁明显 核染色质疏松 未转化和转化淋巴细胞的形态特征 转化的淋巴细胞 未转化的淋巴细胞 淋巴母细胞 过渡型 细胞大小(直径μm) 12～20 12～16 6～8 核大小、染色质 增大、疏松 增大、疏松 不增大、密集 核仁 清晰、1～4个 有或无 无 有丝分裂 有或无 无 无 胞质、着色 增多、嗜碱 增多、嗜碱 极少、天青色 浆内空泡 有或无 有或无 无 伪足 有或无 有或无 无 2. 淋巴细胞转化的刺激物 非特异性刺激物： PHA ------T细胞 ConA -------T细胞 PWM -------T、 B细胞 LPS -------B细胞 特异性刺激物： 异种抗原 同种组织抗原 3. 检测方法