HPLC高效液相色谱培训 PPT精编PPT课件.ppt

第五节 影响分离的因素与操作条件的选择 3. 制备型液相色谱 制备型液相色谱：结构与分析型一样，但泵流量大、进样量大、采用制备柱；柱后馏分收集器。 制备柱：内径20～50mm，柱长50cm。 第三节 HPLC分离类型与原理 分离过程：亲和色谱是吸附色谱的发展，在分离过程中涉及疏水相互作用、静电力、范德华力和立体相互作用。在键合了某类配体的亲和色谱柱上加入含生物活性大分子的样品，只有那些与该柱中配位体表现出明显亲和性的生物大分子才会被吸附，这些被吸附的生物分子只有在改变流动相（缓冲溶液）的组成时才会被洗脱。 　　应用：亲和色谱主要用于蛋白质和生物活性物质的分离与制备。 第三节 HPLC分离类型与原理 第三节 HPLC分离类型与原理 Affinity chromatograph 第四节 HPLC的固定相和流动相 HPLC固定相以承受高压能力来分类，可分为刚性固体和硬胶两大类。 刚性固体以二氧化硅为基质，可承受7.0×108～1.0×109Pa的高压，可制成直径、形状、孔隙度不同的颗粒。如果在二氧化硅表面键合各种官能团，就是键合固定相，可扩大应用范围，它是目前最广泛使用的一种固定相。 硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。承受压力上限为3.5×108Pa。 固定相按孔隙深度分类，可分为表面多孔型和全多孔型固定相两类。 一、液相色谱固定相（stationary phases of LC） 液相色谱固定相的物理结构 第四节 HPLC的固定相和流动相 （一）液-液分配及离子对分离固定相 1．全多孔型固定相 它由直径为10 μ m的氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体微粒凝聚而成。早期采用100μm的大颗粒，表面涂渍固定液，性能不佳已不多见； 现采用10μm以下的小颗粒，化学键合制备柱填料； 硅胶微粒如国外的Porasil，Zobbex、Lichrosorb系列，上海试剂一厂的堆积硅珠，青岛海洋化工厂的YWG系列，天津试剂二厂的DG系列等。 也可由氧化铝微粒凝聚成全多孔型固定相，如国外的Lichrosorb ALOXT。这类固定相由于颗粒很细（5～10μm），孔仍然较浅，传质速率快，易实现高效、高速。特别适合复杂混合物分离及痕量分析. 第四节 HPLC的固定相和流动相 2. 表面多孔型固定相（薄壳型微珠担体） 它的基体是实心玻璃珠，在玻璃球外面覆盖一层多孔活性材料，厚度为1 ～ 2μm。如硅胶、氧化铝、离子交换剂、分子筛、聚酸胺等。 表面活性材料为硅胶的固定相如国外的Zpax，Corasil I和II，Vydac，Pellosil以及上海试剂一厂的薄壳玻璃珠等； 表面活性材料为氧化铝的固定相，如Pellumina； 第四节 HPLC的固定相和流动相 为聚酰胺的，如Pellion。这类固定相的多孔层厚度小、孔浅，相对死体积小，出峰迅速、柱效亦高；颗粒较大，渗透性好，装柱容易，梯度淋洗时能迅速达平衡，较适合做常规分析。 由于多孔层厚度薄，最大允许量受限制。即表面积小，柱容量底。 第四节 HPLC的固定相和流动相 第四节 HPLC的固定相和流动相 3. 化学键合固定相 化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广； c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N 第四节 HPLC的固定相和流动相 化学键合固定相的特点 (1) 传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快； (2) 寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击； 耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定； (3) 选择性好，可键合不同官能团，提高选择性； (4) 有利于梯度洗脱； (5) 存在着双重分离机制： (键合基团的覆盖率决定分离机理) 高覆盖率：分配为主； 低覆盖率：吸附为主； 第四节 HPLC的固定相和流动相 （二）液-固吸附分离固定相 种类：硅胶、氧化