转基因五指山小型猪在诱导Ⅰ型糖尿病模型和其后代地红色荧光蛋白基因表达上地应用.pdf

Application of transgenic Wuzhishan miniature pigs in the induction of experimental type Ⅰ diabetes and transgene expression of Red Fluorescent Protein (RFP) in the offsprings . 摘要 转基因克隆技术在改造动物原有基因以生产新的植物品种，和动物品种方 面与传统的育种方式相比较，传统育种方式要经过一个漫长的过程才能筛选出 一中新型的优良品种。目前，研究者已经成功的用转基因克隆技术生产各种的 不同的动物，例如：绵羊，牛，猪，兔子，等…转基因克隆技术能在短时间内 为科学研究生长出一个适宜的品种，缩短育种的时间。转基因克隆技术已经广 泛的应用在生产生活中的各个领域，在新品种选育，人类疾病的先关研究等方 面已是一种强有力的工具。 一、用四氧嘧啶诱导克隆五指山小型猪Ⅰ型糖尿病模型。利用不同浓度四氧 嘧啶诱导克隆五指山小型猪Ⅰ型糖尿病模型，以探索克隆动物构建糖尿病模型 应用于糖尿病治疗及相关研究。分别采用不同浓度的四氧嘧啶处理克隆五指山 小型猪；选取健康的克隆五指山小型猪，分为一次注射组，和对照组。禁食 16 小时后，将 10%浓度的四氧嘧啶通过耳缘静脉注射；一次注射组，B 组分别按 170mg/kg 注射一次，对照组注射适量的生理盐水。每隔 24 小时静脉采血检测 血糖、胰岛素水平、体重，一周后进行糖耐实验，病理学检测。B 组 (12.18±0.70 mmol/L) 中的 170mg/kg 注射剂量血糖显著升高，空腹血清胰岛素 B 组(5.194±0.368 IU/mL)低于对照组(7.578±0.539 IU/mL)，并且糖耐量异常，胰 腺组织切片观测到胰腺胰岛 β 细胞受损。基于以上实验我们制作的克隆五指山 小型猪Ⅰ糖尿病模型可以用于糖尿病药物测试和新的治疗方法的研究，并且对 糖尿病治疗的研究有着重大意义。 二、红色荧光蛋白转基因五指山小型猪及其后代的外源基因表达。对红色荧 万方数据 Application of transgenic Wuzhishan miniature pigs in the induction of experimental type Ⅰ diabetes and transgene expression of Red Fluorescent Protein (RFP) in the offsprings . 光蛋白转基因五指山小型猪及其后代的血液生理指标，和红色荧光基因表达情 况进行分析。 探索红色荧光蛋白转基因五指山小型猪的繁殖能力，及其外源 基因表达稳定性。实验方法将pCX-mRFP 1 转染猪耳成纤维细胞，作为供核细 胞，采用体细胞核移植（SCNT ）技术，生产的红色荧光转基因五指山小型猪 F0 。再将红色荧光猪与非转基因五指山小型猪进行杂交，产下杂交的具有红色 荧光蛋白基因的后代 F1 代，并对其进行荧光分析和血液样本常规分析。在红 色荧光蛋白基因阳性的五指山小型猪F1 的外观与母本F0 表现一致，呈鲜艳的 粉红色；血液样本分析显示 F0 代，F1 代的血液生理指标无显著性差异；红色 荧光蛋白基因阳性的五指山小型猪 F1 解剖，各种组织和器官在手提式长波紫 外灯下和野生型的非转基因五指山小型猪的组织和器官比较；其中一部分组织 被制作成组织切片在荧光显微镜下进行荧光分析；上述实验结果显示红色荧光 蛋白基因阳性的五指山小型猪 F1 与母本 F0 表现一致，mRFP1 基因稳定的遗 传到 F1 代中并在器官组织中有效地表达。我们生产的红色荧光蛋白转基因猪， 中的红色荧光蛋白基因，能够稳定的