2015版中国药典微生物限度检查法计数法修订解析.pptVIP

五、计数方法适用性试验 抑菌性样品方法适用性-例3：酮康唑洗剂 2、根据以上判断，初步设定的方法适用性试验如下： （1）样品制备：称取供试品10g加入含有中和剂聚山梨酯80的胰酪大豆胨肉汤中，制成1:10的供试液；吸取1:10的供试液20ml加入80ml含有中和剂聚山梨酯80的胰酪大豆胨肉汤中，摇匀制成1:50供试液。 （2）试验组： ①吸取1:50的供试液9.9ml，共10份，每份中加入0.1ml的要求试验菌悬液后摇匀，确认需氧菌总数测定方法。 ②另吸取1:10的供试液9.9ml，共4份，每份中加入0.1ml的要求试验菌悬液后摇匀，确认霉菌和酵母菌总数测定方法。 * 五、计数方法适用性试验 抑菌性样品方法适用性-例3：酮康唑洗剂 （3）中和剂对照组：吸取含有中和剂聚山梨酯80的胰酪大豆胨肉汤9.9ml，每份中加入与试验组相同的菌悬液后摇匀。 （4）菌液对照组：吸取胰酪大豆胨肉汤9.9ml，每份中加入与试验组相同的菌悬液后摇匀。 （5）试验组、中和剂对照组和菌液对照组摇匀后，分别从所有细菌试验菌试管中吸取10ml加入直径14cm的3个平皿中，加入胰酪大豆胨琼脂培养基；另从真菌试管中分别吸取10ml加入直径14cm的3个平皿中，加入沙氏葡萄糖琼脂培养基。每种试验菌平行制备2份。 * 五、计数方法适用性试验 抑菌性样品方法适用性-例3：酮康唑洗剂 （6）供试品对照组：吸取1:50的供试液10ml加入直径14cm的3个平皿中，平行2份，加入胰酪大豆胨琼脂培养基；吸取1:10的供试液10ml加入直径14cm的3个平皿中，平行2份，加入沙氏葡萄糖琼脂培养基，摇匀。 （7）将以上胰酪大豆琼脂平皿放入30～35℃，沙氏葡萄糖琼脂平皿放入20～25℃进行培养，细菌培养不超过3天，真菌培养不超过5天，在3天和5天分别进行计数。 （8）结果计算： ①判断试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组的比值是否在0.5～2范围内。 * 五、计数方法适用性试验 抑菌性样品方法适用性-例3：酮康唑洗剂 ②中和剂对照组的菌落数与菌液对照组的菌落数的比值应在0.5～2范围内。 ③如果以上均满足要求，则适用性试验结果满足要求。 * 五、计数方法适用性试验 3、试验结果-（1）需氧菌总数： 菌种 菌液对照组 试验组 稀释度为1:50 中和剂 对照组 可接受标准（50%～200%） 3天 5天 3天 5天 3天 5天 3天 5天 金黄色葡萄球菌 43 / 36 / 43 / 21.5 / 铜绿假单胞菌 20 / 18 / 17 / 10 / 枯草芽孢杆菌 61 / 11 / 44 / 30.5 / 白色念珠菌 52 52 0 0 54 55 26 26 黑曲霉 41 蔓延 26 / 36 蔓延 20.5 / ①供试品对照组（TSA）： 0 cfu/平皿 1#；0 cfu/平皿 2#；0 cfu/平皿 3#。 ②阴性对照组（TSA）： 0 cfu/平皿 1#；0 cfu/平皿 2#；0 cfu/平皿 3#。 * 五、计数方法适用性试验 3、试验结果-（2）霉菌和酵母菌总数： 菌种 菌液对照组 试验组 稀释度为1:10 中和剂 对照组 可接受标准（50%～200%） 3天 5天 3天 5天 3天 5天 3天 5天 白色念珠菌 58 59 0 0 65 67 29 29.5 黑曲霉 27 蔓延 15 蔓延 26 蔓延 13.5 / ①供试品对照组（SDA）： 0 cfu/平皿 1#；0 cfu/平皿 2#；0 cfu/平皿 3#。 ②阴性对照组（SDA）： 0 cfu/平皿 1#；0 cfu/平皿 2#；0 cfu/平皿 3#。 * 五、计数方法适用性试验 抑菌性样品方法适用性-例3：酮康唑洗剂 4、小结：用中和剂以及稀释法均不能使白色念珠菌和枯草芽孢杆菌恢复，进一步用薄膜过滤法进行方法适用性试验的优化： （1）用含5%聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml预湿滤膜； （2）取1:10的供试液10ml加入预湿后的滤膜中，立即过滤。 （3）用含5%聚山梨酯80的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗200ml，100ml/次，在第二次冲洗液中加入50cfu试验菌，滤干后将滤膜贴于胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂平板上。 * 三、通用要求 6、菌种 （1）原则 不同来源菌种在实际使用时应依据《中国药典》2010年版附录Ⅹ Ⅷ G药品微生物实验室规范指导原则的要求，药品微生物检验用试验菌应来自认可的国内或国外菌种保藏机构的标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性等效的商业派生菌株。 * 三、通用要求 （2）菌种编号 CMCC——中国医学菌种保藏中心 CMCC(F) 或 CMCC(B)