实验一-细胞膜的渗透性及去污剂对红细胞膜稳定性的影响.pptVIP

* 细胞生物学实验 主讲教师： 余光辉， 李 劲，袁 琳，刘 红 实验教师： 刘梅芳，冯天辉 2008年9月 综合 6 酸性磷酸酶的显示方法 六 设计性 5 DNA的孚尔根(Feulgen)反应 七 36 合 计 设计性 5 植物凝集素对红细胞的凝集反应 八 综合 4 线粒体和细胞核的制备与观察 五 综合 4 叶绿体的分离与荧光观察 四 综合 4 线粒体和液泡系的超活染色与观察 三 综合 4 植物细胞骨架和胞间连丝的观察 二 定性 4 细胞膜的渗透性及去污剂对红细胞膜稳定性的影响 一 实验性质 学时数 实验名称 序号 实验一 细胞膜的渗透性及去污剂对红细胞膜稳定性的影响 一 细胞膜的渗透性 （一）、实验目的 　　1.了解细胞膜的渗透性 　　2.了解各种小分子物质跨膜进入红细胞的速度 1 物质运输小分子： 大分子： （二）、实验原理 2. 等渗 （isotonic or isosmotic）溶液和溶血 在等渗溶液中的红细胞保持正常大小和双凹圆碟形；在渗透压递减的一系列溶液中，红细胞逐步胀大并双侧凸起，当体积增加30%时成为球形；体积增加45%～60%则细胞膜损伤而发生溶血，絮状物消失，溶液由悬浊液变为澄清，这时血红蛋白逸出细胞外。 将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血，由于溶质透入速度互不相同，因此溶血时间也不相同。 （三）、实验材料、用品 1. 器材 50ml烧杯，试管(1～10cm),试管架，移液管(5mL、0.5mL). 2. 材料 鸡血. 3. 试剂 0.17mol/L氯化钠，0.17mol/L氯化铵，0.17mol/L醋酸铵，0.17mol/L硝酸钠，0.12mol/L草酸铵，0.12mol/L硫酸钠，0.32mol/L葡萄糖，0.32mol/L甘油，0.32mol/L乙醇，0.32mol/L丙酮， （四）、实验步骤 鸡血细胞悬液 取50ml小烧杯一个，加1份鸡血(加抗凝剂）和10份0.17mol/L氯化钠，形成一种不透明的红色液体，此即为稀释的鸡血. 2. 低渗溶液 取试管一支，加入5ml蒸馏水，再加入0.5ml稀释鸡血，注意观察溶液颜色的变化，由不透明的红色逐渐澄清，说明红细胞发生破裂造成100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。 3. 鸡红细胞的渗透性 1）取试管一支，加入0.17mol/L氯化钠5ml，再加入0.5ml稀释鸡血，轻轻摇动，注意观察溶液颜色有无变化，有无溶血现象，为什么？ 不 同 低 渗 溶 液 中 的 溶 血 现 象 11. 5ml丙酮+0.5ml稀释鸡血 10. 5ml乙醇+0.5ml稀释鸡血 9. 5ml甘油+0.5ml稀释鸡血 8. 5ml葡萄糖+0.5ml稀释鸡血 7. 5ml硫酸钠+0.5ml稀释鸡血 6. 5ml草酸铵+0.5ml稀释鸡血 5. 5ml硝酸钠+0.5ml稀释鸡血 4. 5ml醋酸铵+0.5ml稀释鸡血 3. 5ml氯化铵+0.5ml稀释鸡血 2. 5ml氯化钠+0.5ml稀释鸡血 1. 5ml蒸馏水+0.5ml稀释鸡血 结果分析 时间 是否溶血 试管编号 注意事项 由于溶血时间有快有慢，故要求计时要精确到秒。 每一管计时的起点要一致。 移液管的正确使用方法。 试管振荡时的正确操作。 （五）、实验结果 将观察到的现象列入下表，对实验结果进行比较和分析。 二 去污剂对红细胞膜稳定性的影响 （一）、实验目的 掌握用比色计测量去污剂对细胞膜溶解作用的原理。 了解各种去污剂对细胞膜稳定性的影响，学会比较这种影响的方法。 （二）、实验原理 多种去污剂可以溶解细胞膜上的磷脂化合物，从而使细胞膜破裂，释放出细胞内物质。 本实验以红血球为材料，检测几种去污剂破坏红血球细胞膜的作用。通过测定几种去污剂作用后的无细胞溶液在540毫微米（血红蛋白的特异吸收高峰）波长处的光密度值，进行检验。 （三）、实验材料、用品 1、材料：鸡血 2、试剂： （1）中性去污剂： 10 mL/L (1%) Triton X-100 ， （2）阴离子去污剂： 1 g/L (0.1%) 十二烷基硫酸钠（SDS） （3） 1000 mg/L Triton X-100: 用生理盐水配制以下不同浓度： 180mg/L 、 170mg/L、 160mg/L、 150mg/L、 140mg/L、 130mg/L、 120mg/L、100mg/L. 3、仪器： 722型分光光度计，离心机，移液管（5、1、0.5mL），试管，离心管，恒温水浴