分子生物学实验复习答案.docVIP

实验一：DNA的制备 为什么分子生物学实验时需要注意EB污染？ 答：溴化乙锭（EB）可以嵌入碱基分子中，导致错配，故为强诱变剂，具有高致癌性。由于溴化乙锭具有一定的毒性，实验结束后，应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置，以避免污染环境和危害人体健康。 　 DNA加样缓冲液的用途？ 答：1.增加样品密度以保证RNA或DNA沉入加样孔内;2.使样品带有颜色便于简化上样过程;3.其中的染料在电场中可以预测的泳动速度向阳极迁移 DNA电泳时所用的琼脂糖凝胶，其浓度是如何决定的？ 答：一个给定大小的线性DNA分子，其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成反平行线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kbde DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%，大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%。 琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理？ 答：核酸分子是两性解离分子，DNA分子在高于其等电点的PH溶液中带负电荷，在pH值为8.0-8.3时，核酸分子中碱基几乎不解离，而磷酸全部解离，核酸分子带负电，在电场中向正极移动。DNA分子在电场中通过凝胶介质而泳动，除电荷效应外，凝胶介质还有分子筛效应，与DNA分子大小及构象有关，从而达到分离核酸片段检测其大小的目的。对于线性DNA分子，其电场中的迁移率与其分子量的对数成反比，因此通过已知大小