ABO与Rh血型鉴定操作规程.doc

ABO和Rh (D)血型鉴定操作规程(盐水法) 一 ?目的 规范ABO/Rh (D)血型鉴定的操作流程；保证临床用血的安全性 及有效性。 职责 血库技术人员负责ABO和Rh (D)血型鉴定 适用范围 适用于血库ABO和Rh (D)血型鉴定血标本 所需材料和设备 材料 抗-A、抗-B、抗-D试剂、A、B、0型反定型试剂红细胞、生理盐 水、小试管、滴管、患者血标本。 设备 荇通离心机、显微镜、血型血清学专用离心机。 操作步骤 将标本2000r/分钟离心2分钟，使标本血浆/血清与红细胞分 离，并吸取红细胞配制3%悬液。 取小试管3支，分别标明-A、抗H3、抗-D，用滴管分别加抗-A、 抗-B、抗-D试剂各2滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者3%红 细胞悬液1滴，混匀。 另取小试管3支，分别标明A、B、0细胞，用滴管分别加入受 检者血淸2滴于试管底部，再分别以滴管加入3% A、B、0型试剂红 细胞悬液1滴，混匀。 以lOOOr/分钟离心1分钟。 将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无 凝集（或溶血）现象，如肉眼不见凝集，应将反应物倒在玻片上，再 以显微镜检查。 ABO血型结果判定（见下表）： ABO血型结果判断 分型试剂+受检者红细胞（正定型） 受检者血清+试剂红细胞（反定型） 抗-A 抗-B A细胞 B细胞 0细胞 血型 + — — + — A — + + — B — — + + — 0 + + — — — AB 注：“ + ”凝集；“一”不凝集 Rh （D）血型判定：红细胞与抗-D试剂凝集为Rh （D）阳性 无凝集力Rh阴性。 凝集强度判断标准： 4+红细胞凝集成一火块，背景清晰透明； 3+红细胞凝集成数小块，背景尚清晰； 2+红细胞凝块分散成许多小块，背景可见到游离红细胞； 1+肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞； 士镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围右许多游离红细 胞; 混合外观凝集（Mixed Field, MF）是指镜下可见少数红 细胞凝集，而绝大多数红细胞仍分散分布； -（阴性）镜下未见凝集，红细胞均匀分布。 注意事项 单克隆抗体试剂和试剂细胞（除谱细胞外）每次使用前必须与相 对应的红细胞和血清做阳性、阴性对照，以检测其活性。 观察结果时既要看有无凝集或溶血现象，更要注意凝集强度，此 有助于A、B亚型、类B或Cis （顺式）AB的发现。 人红细胞ABO血型检验结果是根据红细胞的抗原和血清/血浆中 的抗体反应结果所决定，因此正反定型的结果应该一致。正反定型起 到一个互相验证和质控的作用。只有正反定型结果相符才能正确判定 ABO血型。 反定型对ABO亚型的发现特别有帮助。原因是亚型患者细胞上A 或B抗原很弱，通过正反定型易于发现二者结果不一致，从而引起 警惕。 如果正反定型不一致，则需进一步鉴定。可在止定型试验中增加 抗-A1、抗-AB及抗-11;反定型试验中增加A2、0及自身细胞。正定 型试验中的抗-AB是用来确认弱A和弱B抗原，抗-A1用来鉴定A亚 型，抗-H用于鉴定亚型及孟买型；反定型试验中的A2细胞用于鉴定 A2亚型,0型细胞用于鉴定是否存在ABO系统以外的同种抗体影响型， 自身对照用于鉴定是否存在自身抗体影响定型。如果是0型细胞或自 身对照为阳性，则定型结果不可靠，必须进一步进行血型鉴定。 ABO正反定型不一致的原因： 新生儿尚未形成ABO同种抗体，所以三个月内的新生儿只 要求做正定型确定ABO血型。 漏加试剂，试剂污染或失效、血标本和试剂搞错等，均可 造成假阴性、假阳性结果。 器材不洁可产生假阳性结果。 分型血清效价太低，亲和力不强等均可使凝集反应强度减 弱，易误定血型。 红细胞悬液过浓或过淡，导致抗原抗体比例不适当，出现 前带或后带现象，易误判为假阴性。 受检者红细胞上抗原位点过少(如亚型)或抗原性减弱(见 于白血病或某些恶性肿瘤)以及类B或CisAB等，均可使 凝集反应强度减弱。 受检者血清蛋白紊乱(如巨球蛋白血症)或实验温度过高， 常引起细胞呈缗线状排列。 受检者血清中缺乏应有的抗-A或抗-B，如丙种球蛋白缺乏 症，可引起正、反定型不符。 各种原因引起的红细胞溶血，误判为不凝集；部分溶血时， 可溶性血型物质中和了相应的抗体，或者患者血清中血型物 质过多，中和了相应抗体，可导致假阴性结果。 由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定 型不符的原因。近期曾输过异型血，使患者血液标木成为不 同型别的红细胞混合物，定型时显示“混合外观凝聚”现象。 嵌合体血型体内有两群红细胞，定型时显示“混合外观凝集” 现象。 获得性类B由于革兰阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类 B”的活性。 药物等因素药物、右旋糖及静脉注射某些造影剂聚集而类似 凝集。 血清中右意外抗体，如自身抗-1，常干扰定型。 老年