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- 2019-08-07 发布于江苏
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用NaCl溶液 ①加2 mol/L NaCl溶液,溶解提取的细胞核物质 ②(加蒸馏水)0.14 mol/L NaCl溶液使DNA析出 ③加2 mol/L NaCl溶液,溶解滤取的DNA黏稠物 ④用2 mol/L NaCl溶液,溶解丝状物用于鉴定DNA 4.什么是3′端和5′端?DNA复制为什么需要引物? 为了明确地表示DNA的方向,通常将DNA的羟基(—OH)末端称为3′端,而含磷酸基团的末端称为5′端;一个双链DNA分子中含2个3′端和2个5′端,如果一条链的方向是3′→5′,则另一条链的方向就是5′→3′,这就是反向平行的含意。 DNA聚合酶不能从头开始合成DNA,而只能从3′端延伸DNA链。PCR实验中,引物长度通常为20~30个核苷酸。 5.PCR实验中应注意哪些问题?如何进行PCR结果的分析与评价? (1)PCR实验中的注意事项: ①避免外源DNA污染:所用仪器、缓冲液、蒸馏水等使用前进行高压灭菌。 ②缓冲液和酶分装成小份,-20 ℃低温保存。 ③每添加一种反应成分,更换一个移液器的枪头。 ④混匀后离心处理,使反应液集中在离心管底部。 (2)PCR结果的分析与评价: ①对于教材中的方法,可以通过计算DNA含量来评价扩增的效果。 原理:DNA在260 nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰,峰值的大小与DNA的含量有关。 过程:稀释
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