生物化学实验指导 - 泰山医学院.docVIP

PAGE 120 PAGE 240 生物化学实验指导 生物化学教研室前 言 21世纪是生命科学的世纪,生物化学与分子生物学是当代生命科学领域中一门重要的基础学科,它涵盖的基础理论,基本知识,基本技术与医学研究各学科领域密切相关,其理论与技术的发展,推动了生命科学的发展,对人类的科技进步与文明产生巨大影响。 生物化学实验是医学院校学生必修的一门基础实验技术课程，其研究技术的发展与应用是依据物理学、化学及生物学的基本理论和实验方法而建立起来的。20世纪20年代微量分析的发展，30年代电子显微镜的出现，40年代层析技术和电泳技术的兴起，以及同位素示踪技术、各种光谱技术、核磁共振技术的应用，激光、超导等新技术的出现，电子计算机技术的突飞猛进，使生物化学实验手段提高到一个崭新的水平，掌握生物化学实验方法和研究技术，对医学院校学生来说是十分重要的。 本门课程主要侧重于给学生以基本的实验方法和技能的训练，让学生了解并掌握生物化学的四大基本实验方法，即：分光光度法、离心法、层析法和电泳法。同时也注意引进一些新近发展起来的、重要的生物化学及分子生物学研究技术，作为学生学习其他专业课程和进入科学研究领域的准备。 由于编者水平有限，教材中可能有一些错误和不足，望同行专家和使用者提出宝贵意见。 编 者 2012.03 目 录 第一章 生物化学实验基本知识与操作 ………………….………………5 第一节 生物化学实验基本 ………….………………………….……5 第二节 生物化学实验基本操作 ……….………………………….……8 第二章 分光光度技术 ……….………………….…….………………25 实验一 双缩脲法测定蛋白质浓度 ………………………………….…39 实验二 Folin-酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质浓度 ……………….……41 实验三 紫外分光光度法测定蛋白质浓度………………….………….…43 实验四 考马斯(Comessie)亮兰结合法测定蛋白质浓度 ………………….45 实验五 BCA法测定蛋白质浓度 ……………….……………………….48 实验六 激素对血糖浓度的影响及血糖的测定 ………………….………50 实验七 碱性磷酸酶(AKP)米氏常数(km)的测定和底物浓度对酶促反应速度的影响 ……………….……………………………………….……………57 第三章 生物大分子的提取、沉淀和离心分离技术…………………….…61 第一节 生物材料的选取与预处理 ………. ………………………….…61 第二节 生物大分子的沉淀分离技术 …….…………………………….…66 第三节 生物大分子离心分离技术 …………….……………………….…69 实验八 鸡血SOD的提取、分离及活力测定 ………………….………….76 实验九 碱性磷酸酶的制备及活力测定……………………….………………79 实验十 酪蛋白的制备 … …….………………………………….…….……83 实验十一 细胞核蛋白质的提取 ……………………………………………85 实验十二 动物肝脏中提取DNA ……………………………………………88 实验十三 猪心肌细胞线粒体可溶性ATP合酶的提纯 ………………………91 第四章 电泳技术 …………………………………………….…….…………96 实验十四 DNA琼脂糖凝胶电泳 ……….……….……. …………………105 实验十五 血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 ….………………….…….………109 实验十六 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同工酶 ………….………113 实验十七 蛋白质分子量的测定——SDS-聚丙烯凝胶电泳 ….….………120 实验十八 聚丙烯酰胺等电聚焦电泳 .……………………………………123 实验十九 醋酸纤维素薄膜对血清蛋白质的电泳 ………………………129 实验二十 双向电泳 …………………………………………………131 实验二十一 垂直板SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清脂蛋白蛋白质……143 第五章 层析技术 … ………………….……………………….…….………147 第一节 层析技术概述 ……………….…………………………….………147 第二节 吸附层析 …………………….……………………….…….………148 第三节 分配层析 …………………….……………………….…….………150 第四节