细胞培养液的配制.PPT

细胞培养液的配制 培养基的选择 依据: 经验、文献、尝试 常用: RPMI1640、DMEM 培养基的来源 市售干粉培养基---自己配制 液体培养基---直接使用(注意有效期) 培养基的除菌方法 过滤除菌: (1) 正压过滤---效率高 (2) 负压过滤---效率低 高压蒸气灭菌: 不含谷氨酰胺，灭菌后另外添加 培养基附加成分的添加 按使用说明或实验要求添加 配制时加: 碳酸氢钠、抗生素、血清等 临用前加: 生物活性因子如EGF、FGF、NGF、PDGF等 RPMI1640培养液配制过程 准备物品 (1) 不锈钢过滤器, 滤膜(0.45μm,0.22μm),磁力搅拌器,天平,烧杯,量筒,盐水瓶 (2) 培养粉,1N HCl,NaHCO3,青霉素,链霉素,胎牛血清,新鲜三蒸水 消毒物品 滤器中放置0.45μm和0.22μm滤膜, 包装, 高压蒸气消毒 配制步骤 (1) 10.4g/包培养粉溶至1L三蒸水中, 磁力搅拌20min (2) 加2g NaHCO3/L, 继续搅拌10min (3) 加青霉素100U/mL(80万U溶至4ml三蒸水, 取0.5ml) 链霉素100U/mL(100万U溶至5ml三蒸水, 取0.5ml))