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用非氨基酸专用柱分离 17 种氨基酸的研究唐桂芬兰尊海彭爱娟(郑州牧业工程高等专科学校中心实验室, 郑州 450008)摘 要 运用W 用非氨基酸专用柱分离 17 种氨基酸的研究 唐桂芬 兰尊海 彭爱娟 (郑州牧业工程高等专科学校中心实验室, 郑州 450008) 摘 要 运用W a te r s 公司的 P ico 2T ag 分析方法, 采用仓光公司的 OD S2AM 柱 (4. 6×250mm ) 进行 17 种氨基酸分离, 通 过对流动相 A 、B 液梯度洗脱的反复调整实验, 最终在 25m in 内使 17 种氨基酸得到较好的分离, 该法用于测定饲料样品中氨 基酸的含量, 结果较为理想。 关键词 氨基酸; 高效液相色谱法; 分离 Separa t ion of 17 am in o ac ids w ith a n on -am in o ac id spec ia l co lum n T ang G u if en , L an Z u nh a i and P eng A ij u an (C en t ra l L abora tory of Z h eng z h ou C ol leg e of A n im a l H u sband ry E ng inee r ing , Z h eng z h ou 450008) A BSTRACT T h e W a te r s P ico 2T ag ana ly t ica l m e tho d and th e OD S - AM co lum n ( 4. 6 × 250mm ) w e re u sed to sep a ra te 17 am ino ac id s. R ep ea ted ad ju stm en t o f g rad ien t e lu t io n o f th e m o b ile p h a se s A and B liqu id s re su lted in goo d sep a ra t io n o f 17 am ino ac id s w ith in 25m in. Sa t isfac to ry re su lt s can be ach ieved w h en th e m e tho d is u sed in a ssay im g am ino ac id s in feed sam p le s. Key words am ino ac id; h igh p e rfo rm ance liqu id ch rom a to g rap h y; sep a ra t io n 高效液相色谱法分离氨基酸的方法较多, 分离 柱要求用高效的氨基酸专用柱, 一般的氨基酸专用 柱价格较贵, 工作中我们应用仓光公司的 OD S2AM 柱进行 17 种氨基酸的分离, 结果较为理想。 1 实验方法 1. 1 仪器和试剂 1. 1. 1 仪器 W a te r s 公司高效液相色谱仪 (具 490 紫外检测器、510 泵、590 泵、680 梯度控制仪、740 数 据 处理机)、P ico 2T ag 衍生工作台、仓光公司 OD S2 AM 柱 ( 5Λm , 4. 6×250mm )、分析天平、离心机、超 声波清洗器、恒温箱。 1. 1. 2 试剂 甲醇、乙腈: 色谱纯 水: 高纯水 氨基酸混合标样: 2Λm o l?mL ( 中国农业科学院 分析测试中心研制)。 干燥溶液: 甲醇: 水: 三乙胺= 2∶2∶1。 衍生化溶液: 甲醇: 水: 三乙胺: 异硫氰酸苯酯= 7∶1∶1∶1。 样品稀释液: 取磷酸氢二钠 710m g 于 1000mL 流动相 A : 称取 19. 09g 三水乙酸钠于 1000mL 水中溶解, 加入 0. 5mL 三 乙 胺、200ΛL ED TA 储 备 液 (1m g?mL 冰箱储存最多 1 个月) , 混匀, 用 5% 冰 乙 酸 调 pH ∶ 6. 4, 用 0. 45Λm 滤 膜 过 滤, 取 滤 液 940mL , 与 60mL 乙腈混合, 超声脱气。 流动相 B : 乙腈: 水= 3∶2, 混匀, 超声脱气。 1. 2 氨基酸混合标样的衍生 取氨基酸混合标样 5ΛL 于一玻璃小管中, 在 P ico 2T ag 衍生工作台上抽 干, 加干燥溶液 10ΛL , 涡旋混匀, 抽干, 再加入衍生 化溶液 20ΛL , 涡旋混匀, 衍生 20m in , 抽干, 加入样 品稀释液 200ΛL , 混匀, 此液为上机液。 1. 3