微生物的代谢调节和代谢工程.PPT

* 1、抗反馈突变菌株 ? 在以积累末端产物为目的的发酵生产中，如果代谢途径单一无分枝，往往不能选用营养缺陷型突变株。要提高产量，最好采用抗反馈调节突变株。 ? 抗反馈调节突变株是一种解除合成代谢反馈调节机制的突变型菌株。 其特点是所需产物不断积累，不会因其浓度超量而终止生产。 工业上，生产氨基酸、嘌呤、嘧啶和维生素的菌种大都是抗反馈突变株。 * 2、营养缺陷型菌株 * * 第七节 次级代谢与次级代谢调节 * 初级代谢 微生物从外界吸收各种营养物质，通过分解代谢和合成代谢生成维持生命活动的物质和能量的过程。 初级代谢产物 微生物通过代谢活动所产生的、自身生长和繁殖所必需的物质，如氨基酸、核苷酸、多糖、脂类、维生素等。不同种类的微生物细胞中，初级代谢产物的种类基本相同。 * 次级代谢 次级代谢是在一定的生长时期（一般是稳定生长期），微生物以初级代谢产物为前体合成的对微生物本身的生命活动没有明确功能的物质的过程。 次级代谢产物 微生物通过次谢活动所大量积累的抗生素、生物碱、类萜（ferpenoid）、酚类、色素等。 * 1、次级代谢的调节类型 （1）、酶合成的诱导调节 （2）、反馈调节 * （1）、酶合成的诱导调节 把一些对次级代谢产物产生有诱导作用的物质加入发酵培养基中可增加产量。 * （2）、反馈调节 次级代谢产物的自身反馈抑制和反馈阻遏； 分解代谢产物调节； 初级代谢产物的调节； 磷酸盐调节。 * 次级代谢产物的自身反馈抑制和反馈阻遏 如青霉素、链霉素、卡那霉素等的生物合成途径中都发现末端产物的反馈调节作用。 * * 1， 补加前体类似物 在合成途径已基本清楚的条件下，向发酵培养基中补加前体是增加次级产物的有效方法。如青霉素G的生产中，苯乙酰—CoA是限速性因子，补加苯乙酸或其衍生物都能增加青霉素G的产量。青霉素分子是6—APA环形成后，再形成不同侧链。加入不同的前体就可以得到不同种类的青霉索，补加苯氧乙酸即得到青霉素V。多肽类和放线菌素类抗生索的合成中，也都能通过加入不同前体而得到不同种类的抗生素。这也可以称之为定向合成 。 加入硝酸盐可提高利福霉索的产量，其原因在于它抑制了脂肪酸的合成，使合成脂肪的前体丙二酰-CoA转为利福霉素分子的脂肪环提供前体。 次级代谢产物形成中并不是所有前体类似物都是限制性因子。加入前体提高产量的效果更取决于总体代谢的调节水平。前体物质本身是否易于得到等。这部是在生产应用中需综合考虑的。 2，加入诱导物 把一些对次级代谢产物产生有诱导作用的物质加入发酵培养基中会增加产量，如加蛋氨酸或硫脲可使顶头孢霉增产头孢霉素C，加入巴比妥可提高利福霉素产量等。但在工业生产中还未普遍应用此技术，而只是在选择培养基组成时给以考虑。 3． 防止碳分解代谢阻退或抑制的发生 青霉索发酵中限量流加葡萄糖(或糖蜜)以减少碳分解阻遏的发生，早已是一项很有效的提高产量的方法。 使用寡糖、多糖等缓慢利用的碳源，葡萄糖与麦芽糖、葡萄糖与蔗糖、葡萄糖与淀粉混合碳源的利用，也都能减少碳分解阻遏的发生。 加入影响糖代谢的硫氰酸苄酯可使金霉菌对葡萄糖的利用速度减缓，可增加金霉素的产量。 4． 防止氮代谢阻遏的发生 避免使用高浓度的铵盐做氮源以防止氮代谢阻遏的发生，是抗生索发酵工业生产中比较成熟的经验。在抗生素产生期如补加氮源则会造成发酵逆转，返回生长期，抗生素的产量会大为减少。 使用亚适量(对菌体生长)的磷酸盐，亦是抗生素发酵工业中遵循的原则之一。 为防止碳、氮、磷分解阻遏的发生，应选用黄豆饼粉、蛋白胨类、淀粉类物质为主要原料，而尽量少用易被迅速利用的葡萄糖等。 5． 筛选耐前体或前体类似物的突变抹 加入前体有提高次级产物产量的效果；但过量对菌体又会有毒。筛选对前体育抗性的突变株以减少或消除前体的反馈阻遏，从而可获得高产；如抗苯乙酸的青霉突变株，其青霉素的产量会增加。 半胱氨酸、缬氨酸是 内酰胺类抗生素的前体，筛选上述氨基酸的类似物，三氟亮氨酸、DL—缬氨酸的抗性菌株，其β-内酰胺类抗生索产量会提高。 * 6， 选育抗抗生素突变株 链霉素、氯霉素、金霉素筹多种抗生素都具有抑制产生自身菌体蛋白质的能力。一株高产抗生素产生菌，必然应具备对自身所分泌的抗生索的抗性。筛选抗抗生素产生菌也就成了菌种选育中的常用方法。金霉素、链霉素产生菌的抗性菌株产量有数倍增加的实验室结果已有不少报道。 7． 筛选营养缺陷型的回复突变株 次级代谢产物都来自初级