菠萝蛋白酶粗提液凝胶过滤层析.pptVIP

菠萝蛋白酶粗提液的凝胶过滤层析 一、实验目的 理解和掌握凝胶过滤层析技术原理和实验操作步骤。 二、实验原理 层析 以基质为固定相，以液体或气体为流动相，有效成分 和杂质在这两个相中连续多次进行分配、吸附或交换 作用，最终结果是使混合物得到分离。 种类：柱层析、纸层析、薄层层析、薄膜层析 常用术语 固定相 流动相 床体积，Vt 洗脱体积，Ve 外水体积，Vo 内水体积，Vi 基质体积，Vg 凝胶过滤 利用具有一定孔径的多孔凝胶作为固定相，把分子大小不同的物质分离开的层析技术，又称为分子筛。 凝胶的类型有葡聚糖凝胶（商品名为Sephadex）、聚丙烯 酰胺凝胶、琼脂糖凝胶等。 葡聚糖凝胶用得最多，它是α-1，6葡聚糖与1-氯-2，3- 环氧丙烷反应交联而成的 ，有不同型号的凝胶。 凝胶的吸水能力与凝胶的交联度关系密切。 G表示交联度，G后面的数字是凝胶吸水量（ml/g干胶）乘以10所得的值。 交联度越大，G值小，网状结构致密，颗粒内孔径越小，吸水值小，分辨率高，分级范围窄，机械性能好。 交联度越小，G值大，网状结构疏松，颗粒内孔径越大，吸水值大，分辨率低，分级范围宽，机械性能不好。 三．实验设备: 层析柱(2x20cm)、恒流泵、自动部分收集器、水浴锅、751-紫外分光光度计 四．实验试剂 1、Sephadex G75（葡聚糖G75） 2、柱层析试剂∶0.1M PBS 3