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* 第36讲 微生物的培养与应用 考点一 微生物的实验室培养 1.消毒和灭菌的辨析 [清错破疑] 接种方法操作的注意事项 (1)稀释涂布平板法的缺点:稀释涂布平板法统计样品中菌落的数目往往比实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。 (2)平板划线法纯化大肠杆菌时不同阶段灼烧接种环的目的不同: ①第一次操作:杀死接种环上原有的微生物。 ②每次划线之前:杀死上次划线后接种环上残留的菌种,使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。 ③划线结束后:杀死接种环上残存的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。 角度 微生物的实验室培养 1.(2015·课标全国Ⅰ卷)已知微生物A可以产生油脂,微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题: (1)显微观察时,微生物A菌体中的油脂通常可用______染色。微生物A产生的油脂不易挥发,可选用__________________(填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”)从菌体中提取。 (2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落,可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样,并应选用以________为碳源的固体培养基进行培养。 (3)若要测定培养液中微生物B的菌体数,可在显微镜下用________________直接计数;若要测定其活菌数量,可选用________________法进行计数。 (4)为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度,某同学测得相同时间内,在35 ℃、40 ℃、45 ℃温度下降解10 g油脂所需酶量依次为4 mg、1 mg、6 mg,则上述三个温度中,________ ℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度,应围绕________℃设计后续实验。 解析:(1)油脂可被苏丹Ⅲ染液或者苏丹Ⅳ染液染成橘黄色或红色。由于不易挥发,故采用萃取法。(2)脂肪酶的微生物B可以分解脂肪,故可以以脂肪为碳源的固体培养基进行培养,不产生脂肪酶的微生物无法生存。(3)微生物B的菌体数,可在显微镜下用血细胞计数板直接计数,活菌用稀释涂布平板法。(4)45℃降解10g油脂所需酶量最大,故酶活性最小;40℃温度下降解10g油脂所需酶量最小,故酶活性最大,围绕40℃温度进行后续实验设计。 答案:(1)苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ) 萃取法 (2)油脂(其他合理答案也可) (3)血细胞计数板 稀释涂布平板(其他合理答案也可) (4)45 40 2.为了获得β-胡萝卜素产品,某小组开展了产β-胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。请回答下列问题。 (1)实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是__________________;为了减少灭菌后器皿被污染,灭菌前应该________________。 (2)为了筛选出酵母菌,培养基中添加了青霉素,其目的是____________________。 (3)如图是灭菌锅及其局部剖面示意图,图中甲、乙、丙指示的依次是________。(填序号) ①安全阀、放气阀、压力表 ②放气阀、安全阀、压力表 ③安全阀、放气阀、温度表 ④放气阀、安全阀、温度表 (4)为了将分离到的菌株纯化,挑取了菌落在3块相同平板上划线,结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长,最可能的原因是_________________________。 (5)为增加β-胡萝卜素提取量,在研磨酵母细胞时,添加石英砂的目的是______________;研磨时________(填“需要”或“不需要”)添加CaCO3,理由是____________________。 解析:(1)微生物培养时常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌等,培养皿常用高压蒸汽灭菌、干热灭菌。将培养皿放入灭菌锅之前通常用牛皮纸或报纸包扎避免灭菌后的再次污染。(2)青霉素能破坏细菌的细胞壁并能抑制细菌的繁殖,因此添加青霉素可抑制细菌的生长。(3)乙连接软管为排(放)气阀,甲为安全阀,丙是压力表。(4)三块平板有两块平板长有菌落,说明含有菌株并可在培养基上生长;而其中一块未见菌落,说明菌株死亡,因此,应是在接种过程中接种环灼烧后未足够冷却,使菌株因温度过高被 被杀死。(5)石英砂有助于研磨充分。CaCO3用于中和酸性物质,β-胡萝卜素较耐酸,因此不需添加。 答案:(1)干热灭菌和湿热灭菌(高压蒸汽灭菌) 用牛皮纸(报纸)包扎器皿 (2)抑制细菌(放线菌)生长 (3)① (4)接种环温度过高,菌被杀死 (5)有助于研磨充分 不需要 β-胡萝卜素较耐酸 考点二 微生物的筛选 筛选分解尿素的细菌与分解纤维素的微生物的比较 角度 微生物的分离 3.(2014·课标全国Ⅰ卷)植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题: (1)分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶,该酶是由3种组分
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