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回归方程的相关系数R2达到0.95以上, 这说明该方程适用于产氨短杆菌MA-2、黄色短杆菌MA-3产酶高低的理论预测。为了进一步探讨回归方程预报的实验结果与实际结果相符合程度,将实验值与模型计算值相比, 由表2、3可见, 模型预报的结果与实际实验结果相当一致,相对误差在±5.0 %以内。 根据RSM法分析数据可以绘出响应面及其等高线图, 以确认碳源、氮源及硫酸镁三因素, 分别对产氨短杆菌MA-2和黄色短杆菌MA-3细胞中延胡索酸酶活力的影响, 图1绘出了碳源、氮源与酶活力的三维响应面图。 培养基组成最佳浓度的获取 为了更进一步确证培养基成份的最佳点, 对已回归的非线性模型方程求一阶偏导, 并令其等于零, 可以得到曲面的最大点, 求导方程整理得:对于产氨短杆菌MA-2有: 15320.70+51522.45x2+317.51x3-2×2987.6x1 = 0 835226.6+51522.45x1+15253.01x3-22 = 0 7596.24+317.51x1+15253.01x2-2×1380.71x3 = 0 求解上述三元一次方程,得出对于产氨短杆菌MA-2的最佳条件为: x1=3.19 x2=0.05 x3=3.51 E=27.87ⅹ103 即培养基最佳浓度为:柠檬酸氢二铵3.19%, MgSO4·7H2O 0.05%,玉米浆3.51%。此时,理论上单位产氨短杆菌MA-2菌体延胡索酸酶活力达27.87ⅹ103μmol/g·h。 对于黄色短杆菌MA-3同样可求得培养基最佳浓度为丙二酸2.22%,MgSO4·7H2O 0.05%,玉米浆3.18%,此时,理论上单位黄色短杆菌MA-3菌体延胡索酸酶活力达32.28ⅹ103μmol/g·h。 方程的验证 以该法选出的最适宜培养基浓度进行发酵试验,单位菌体产氨短杆菌MA-2的延胡索酸酶活力达27.88ⅹ103μmol/g·h,实验值与模型计算值相差0.036%,同样黄色短杆菌MA-3单位菌体延胡索酸酶活力达32.26×103μmol/g·h,实验值与模型计算值相差0.06%,证明了用RSM法来寻求两菌最佳培养基浓度是可行的。并表明其结果比优化前提高了10%,比国内外报道的其它菌株有一定提高。 4. 发酵过程中基质浓度的控制: 中间补料法 C源 :经验方法(补糖时间;补糖量;补糖方式) 动力学方法 μ, Qc, Qp N源: 补有机N: 酵母粉,玉米浆等; 补无机N: 氨水、(NH4)2SO4,、氨气等 三. 温度对发酵的影响与控制 1. 温度与发酵的关系 (1)影响酶反应速率:即直接影响发酵过程中各种反应速率; (2)通过改变发酵液物性,间接影响生物合成,表现为: ① 影响基质和O2在发酵液中的溶解传递; ② 影响菌体对某些基质的分解和吸收; ③ 影响生物合成方向。 如:金霉素金霉菌 温度: 300C 主要产金霉素,四环素少; 温度: 30 - 350C 四环素比例增加; 350C四环素比例高; 2. 发酵热(Q发,J/m3?h) 发酵过程中释放出来的净热量; Q发酵= Q生物+ Q搅拌 - Q蒸 - Q显 - Q辐射 Q生物 : 产生菌在生长繁殖过程中,本身产生大量的热称为生物热; Q搅拌 : 由于机械搅拌带动发醇液作机械运动,造成液体间,液体与搅拌器间 的磨擦,产生可观的热量。 Q蒸发 : 空气进入发酵罐后,和发酵液广泛接触进行交换,同时引起水分蒸发 蒸发所需的热量即为蒸发热。 Q显 : 水的蒸发热及排出气体所带的部分显热都散失到外界。 Q辐射 : 由于罐内外的温度不同
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