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鸡类patatin脂肪酶家族 主要参考文献 Jani Saarela, et al. The patatin-like lipase family in Gallus gallus BMC Genomics. 2008, 9: 281 ?Gregory R. Steinberg, et al. Adipocyte triglyceride lipase expression in human obesity Am J Physiol Endocrinol Metab. 2007, 293: E958–E964 Martina Schweiger, et al. Adipose Triglyceride Lipase and Hormone-sensitive Lipase Are the Major Enzymes in Adipose Tissue Triacylglycerol Catabolism J BIO CHEM. 2006, 281(52): 40236–40241 研究背景 脂肪组织是机体最大的能量储存库，当机体需要能量的时候，储存在脂肪组织的甘油三酯在脂酶的作用下被分解为游离脂肪酸,释放入血液参与能量代谢。 如果脂解作用出现障碍或病变，就会影响机体能量的平衡，进而引发肥胖和胰岛素抵抗等疾病。 卵生动物的卵黄是胚胎发育所需营养和调控因子的主要来源，而卵黄是脂质和蛋白质从母体肝脏转运到卵泡中的卵子累积而成。 研究背景 胚胎正常生长依赖于从卵黄分泌到胚循环当中的脂类等营养物质，参与该过程的基因主要有：脂肪酶、脂质转运蛋白和脂蛋白受体基因等，因此产蛋母鸡是一个分析脂质转运和全身脂质代谢精细调控分子机制的最好模型。而且产蛋母鸡的脂质代谢是一个研究激素调控的非常好的例子，因为雌激素不公直接调控合成卵黄前体物质的基因在肝脏中的表达，还可能与脂肪分解和卵黄沉积中脂质的转运过程及胚胎卵黄利用有关。 实验动物 1. Derco产蛋母鸡： 30-40周龄 公鸡：购自海德尔公司 2. 受精蛋在38度和70%的湿度条件下孵化11天后取出，取卵黄囊膜用于RNA抽提 3. 白色(5mm)和黄色(5-12mm)有卵黄的小卵泡 4. 来自F5-F1级卵泡的颗粒细胞 5. 白色脂肪组织：取自鸡的腹腔 6. 其它鸡组织样品，液氮保存。 实验方法 RT-PCR 实时荧光定量PCR In silico characterization 实验结果 一. 鸡PNPLAs基因家族新基因鉴定及序列的获得 PNPLA2 又叫Adipose triglyceride lipase (ATGL), desnutrin, iPLA2ζ, 和TTS-2，是一种分解TG产生DG的关键酶，它的功能非常保守。 Comparative gene identification 58 (CGI58, ABHD5)是ATGL的激活蛋白，人CGI58的异常会导致叫作Chanarin-Dorfman综合症的脂肪代谢疾病，患者的许多组织都含有富含TG的脂滴。鸡CGI58蛋白与人的有79%的同源性，而与激活ATGL相关的氨基酸残基完全保守。 PNPLA3 也叫adiponutrin和iPLA2ε。在禁食情况下，它的表达量受到严重抑制，而AGTL表达量会提高。PNPLA3位于细胞膜，而ATGL位于胞质中。 PNPLA4 又叫gene sequence 2 (GS2)和iPLA2η。它和TGs水解有关，在人的所有组织中有PNPLA4的表达。 PNPLA6 又名neuropathy target esterase (NTE)。在人的血液淋巴细胞和老鼠大脑中有表达，与膜脂的代谢及与神经元和神经胶质细胞相互作用的信号传导有关。 PNPLA7 也叫NTE-related esterase (NRE)，与PNNPL6有很高的相似性。它高表达于前列腺、胰腺和脂肪组织。胰岛素能抑制它的表达。有研究表明它是一种溶血磷脂酶。 PNPLA8 也叫iPLA2γ，中等水平表达于人的各种组织，在人脂肪细胞早期分化时表达上调。 PNPLA9 主要在脂肪组织和大脑中表达，脂肪细胞分化后期表达增加。从中国田鼠卵细胞分离的PNPLA9蛋白能够分解二棕榈酰磷脂酰胆碱，而锚蛋白重复序列是该酶活性所必需的。 PNPLA1和PNPLA5 类patatin脂酶蛋白结构示意图 鸡PNPLAs蛋白Patatin结构域氨基酸序列比对图 二. PNPLAs各基因表达情况 三. In silico characterization 预测ATGL在382-3