第五节---蛋白质的重要性质.pptVIP

3.5 Important properties of proteins 蛋白质与多肽一样，能够发生两性离解，也有等电点。在等电点时(Isoelectric point pI)，蛋白质的溶解度最小，在电场中不移动。 在不同的pH环境下，蛋白质的电学性质不同。在外液pH低于等电点的溶液中，蛋白质粒子带正电荷，在电场中向负极移动；在外液pH高于等电点的溶液中，蛋白质粒子带负电荷，在电场中向正极移动。这种现象称为蛋白质电泳—(Electrophoresis)带电粒子在电场中移动的现象。 电泳 带电粒子在电场力作用下向着所带电荷相反的方向泳动的现象叫电泳。利用这一原理，可以将蛋白质进行分离纯化。 电泳(Electrophoresis) 板状垂直电泳 Isoelectric point (pI) Separation based on charge 由于蛋白质的分子量很大（1-100nm），它在水中能够形成胶体溶液。蛋白质溶液具有胶体溶液的典型性质，如丁达尔现象、布郎运动等。 由于胶体溶液中的蛋白质不能通过半透膜，因此可以应用透析法将非蛋白的小分子杂质除去。 透析法：以半透膜提纯蛋白质的方法叫透析法 半透膜：只允许溶剂小分子通过，而溶质大分子不能通过，如羊皮纸、火棉胶、玻璃纸等 蛋白质胶体溶液的稳定性与它的分子量大小（1～100nm），所带的电荷和水化作用有关。 改变溶液的条件，将影响蛋白质的溶解性质，在适当的条件下，蛋白质能够从溶液中沉淀出来。 定义：蛋白质在溶液中靠化水膜和电荷保持其稳定性，水膜和电荷一旦除去，蛋白质溶液的稳定性就被破坏，蛋白质就会从溶液中沉淀下来，此现象即为蛋白质的沉淀作用。 在温和条件下，通过改变溶液的pH或电荷状况，使蛋白质从胶体溶液中沉淀分离。 在沉淀过程中，结构和性质都没有发生变化，在适当的条件下，可以重新溶解形成溶液，所以这种沉淀又称为非变性沉淀。 可逆沉淀是分离和纯化蛋白质的基本方法，如等电点沉淀法、盐析法和有机溶剂沉淀法等。 等电点沉淀法 盐析法(Salting out)：向蛋白质溶液中加入大量的中性盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠）使蛋白质沉淀析出的现象（水与离子的相互作用增加了蛋白质表面的疏水补丁的相互作用；同时瓦解了以电荷为基础的蛋白质分子之间的作用）。 盐溶(Salting in)：低浓度的中性盐可以增加蛋白质的溶解度，此现象叫………。 有机溶剂沉淀法（脱去水化层、降低介电常数）。在低温下或缩短处理时间可防止或减缓变性） 在强烈沉淀条件下，不仅破坏了蛋白质胶体溶液的稳定性，而且也破坏了蛋白质的结构和性质，产生的蛋白质沉淀不可能再重新溶解于水。 由于沉淀过程发生了蛋白质的结构和性质的变化，所以又称为变性沉淀。 如加热沉淀（次级键）、强酸碱沉淀（影响电荷）、重金属盐沉淀（Hg2+、 Pb2+ 、Cu2+、 Ag2+）和生物碱试剂或某些酸类沉淀等都属于不可逆沉淀。 天然蛋白质因受物理、化学因素的影响，使蛋白质分子的构象发生了异常变化，从而导致生物活性的丧失以及物理、化学性质的异常变化。这种现象称为蛋白质的变性(denaturation)。 a.蛋白质的变性(denaturation) 蛋白质变性后的表现：生物活性丧失；溶解度降低，对于球状蛋白粘度增加；生化反应易进行；光吸收系数增大；组分和分子量不变。 b.引起蛋白质变性的主要因素： 温度（热、冷） 强酸、强碱 尿素和盐酸胍的影响（破坏分子内部氢键、破坏疏水效应） H2N-C-NH2 H2N-C-NH2+Cl- 表面活性剂的影响：如十二烷基硫酸钠（SDS） CH3-(CH2）10-CH2-O-S-O-.Na+ c.蛋白质的复性(Renaturation) 定义：当变性因素除去后，变性蛋白质又可恢复到天然构象，这一现象称为蛋白质的复性（renaturation）。 蛋白质变性的预防和利用：医疗方面（70－75％乙醇消毒）；食品方面；蛋白质制备；酶制剂保存等。 大部分蛋白质均含有带芳香环的Phe、Tyr和Trp。 这三种Aa的在280nm 附近有最大吸收。因此，大多数蛋白质在280nm 附近显示强的吸收。 利用这个性质，可以对蛋白质进行定性鉴定和定量测定。 思考题：⑴蛋白质除了280nm有特征吸收外，在那个波长处还有吸收？ ⑵如果一种含有NADH或NADPH的结合蛋白，在那几个波长处有吸收？（学习了酶学章后回答这个问题） 双缩脲反应 酚试剂反应（Tyr的酚基将福林试剂还原） 考马斯亮蓝反应（染料结合法） * * （1）蛋白质的两性离解和电泳现象 1. PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳 蛋白质样品在丙烯酰胺(Acr)和甲叉双丙烯酰胺(Bis)的凝