第十六章药物分析中的新技术新方法培训课件.ppt

;手性分离色谱;二、手性药物对映体的药效学差异 1. 治疗作用完全依赖一种异构体 如：S(-)-α-甲基多巴 2. 药理作用差别不大 如：异丙嗪 3. 药理作用类似，但反应强度有差别 4. 药理与毒理作用存在“质”的区别;二、手性药物对映体的药动学差异 1. 吸收 2. 蛋白结合 3. 代谢;;四、拆分原理： 为了使对映体转化为化学和物理性质不同的非对映体，就要提供一种手性源（ CDR ） ，使待拆分的对映异构体（样品）、手性作用物（如固定相）和手性源之间形成一个非对映异构分子的络合物。 三点手性识别模式 ;(R) –SE+; 柱前手性衍生化法：对映体混合物以手性试剂作柱前衍生化，形成非对映体，然后以常规（偶见手性）固定相分离。 对手性衍生化试剂的要求：高光学纯度。 常用的手性衍生化试剂：羧酸衍生物类、胺类、异硫氰酸酯类、异氰酸酯类、萘衍生物类、光学活性氨基酸类、固相衍生化试剂。;;手性衍生化特点： 需要高光学纯度的手性衍生化试剂； 反应繁琐费时； 衍生化反应速率重现性较差 只需使用价格便宜、柱效较高的非手性柱 衍生化过程可同时纯化样品;;;;色谱条件 色谱柱：Hypersil C18, 5 ? m, 150?5.0mm ID， 流动相：乙腈?水-乙酸-三乙胺(55 : 45 : 0.1 : 0.02，v/v)， 流速： 1 ml/min, 检测波长：254 nm;酮洛芬对映体衍生化物色谱图;2. CSP 利用手性固定相与对映体消旋物相互作用，其中一个与手性固定相生成不稳定的短暂的对映体复合物，使两种异构体在色谱柱上的保留时间不同，从而得到分离。;常用的手性固定相： 1. Pirkle型固定相 2. 合成多聚固定相 3. 环糊精键合固定相;特点;奈基乙脲键合硅胶柱拆分苏氨酸（A）和苯丙氨酸（B）的p-溴代苯甲酰胺衍生物对映体色谱图;3. CMP 将手性试剂添加到流动相中，利用手性试剂与药物消旋物中各对映体结合的稳定常数不同，以及药物与结合物在固定相上分配的差异，实现对映体的分离。;常用的手性添加剂： 1. 配基交换型手性添加剂 2. 手性离子对络合剂 3. 环糊精添加剂;特点;五、应用1．对某些手性药物进行对映体的纯度检查；2．生物体液中药物对映体的分离分析研究可探索血药浓度与临床疗效的关系；3．在研制手性药物过程中，可分别评价单个对映体的效价、毒性、不良反应、药动学性质；4．必要时，可进行手性药物对映体的制备分离（或拆分）。;高效毛细管电泳 （HPCE）; HPCE是经典电泳技术与现代微柱分离相结合的一种快速、高效的液相分离技术。具有以下特点： 1. 高效 2. 高速 3. 微量 4. 低消耗;高压电源; （一）基本原理： v = veo+ vep = (μeo+μep)E veo：电渗流速度 μeo：电渗流淌度 vep：电泳流速度 μep：电泳流淌度 E： 电场强度 ;－;－;（二）主要分离模式 1. 毛细管区带电泳（CZE） 2. 胶束动电毛细管色谱（MECC） 3. 毛细管凝胶电泳（CGE） 4. 毛细管等电聚焦（CIEF） ;模式;毛细管区带电泳 最基本、最广泛的分离模式。 适用于所有具有不同淌度的荷电粒子的分离，但不能中性物质及质荷比相同的组分。 ;2. 胶束动电毛细管色谱 用离子胶束溶液代替简单的缓冲溶液，使中性组分可按其疏水性的不同及在两相间的分配系数的不同而分离。采用手性分配相，可用于手性化合物的分离。;3. 毛细管凝胶电泳 凝胶的网络结构对溶质具有分子筛的作用，可分离质荷比相同但分子大小不同的组分。 在分子生物学和蛋白质化学上有着十分广泛的应用。;4. 毛细管等电聚焦 根据蛋白质的等电点不同而进行分离。;应用： 1. 监测药物生产过程 如：监测青霉素发酵液中有关物质的量;青霉素发酵液的高效毛细管电泳图 1. 青霉素G钠 ；2. 6-APA ；3. 对羟基苯乙酸 ； 4. 邻羟基苯乙酸 ；5. 苯乙酸;2. 中药成分分析 如：黄酮及其甙类分析;黄芩中6种黄酮类成分的 胶束电动毛细管色谱分离图 1.汉黄芩甙；2. 黄芩素；3.黄芩甙；4. 千层子素；5. 汉黄芩素；6.内标水杨酸；7.白杨素;3. 手性拆分 4. 体内分析;质谱法及其应用;一、离子源及离子化技术 1、