菌落总数和大肠菌群.ppt

划线接种EMB平板 ↓36±1℃,48±2h 挑取典型或可疑菌落（黑色中心），移种营养琼脂 ↓36±1℃,48±2h —————————— ↓ ↓ 生化反应鉴定 革兰氏染色： 靛基质试验（I）+/- 阴性无芽孢杆菌 甲基红反应（MR）+ Voges-Proskauer反应（Vi）- 枸橼酸利用试验（C）- ↓ 按LST阳性管数查MPN表 报告大肠杆菌MPN值 ? *如要进一步确定是否致泻性大肠杆菌，需要进行血清分型和毒素分型 大肠杆菌在EMB上的菌落形态 具黑色中心有光泽 或无光泽的典型菌落 靛基质试验(吲哚试验)(I) 原理：某些细菌能分解蛋白质生成吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚红色化合物。 培养基：色氨酸肉汤 36℃±1 ℃ 培养24h Kovacs氏试剂 加入 接触面红色，阳性 甲基红反应(MR) 　肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。 培养基：MR-VP培养基 阳性 阴性 36℃±1 ℃ 培养24h 1mL+5%α-萘酚乙醇0.6mL+40%KOH0.2mL V-P试验(VP) 　 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。 36℃±1 ℃ 培养48h，加数滴甲基红溶液 阳性 阴性 枸椽酸盐利用试验 　某些细菌能利用枸椽酸盐作为碳源，及磷酸铵作为氮源，将枸椽酸盐分解为二氧化碳，培养基反应后成碱性，由于指示剂的作用，培养基变为兰色。 注: SN标准所用培养基是Kovser肉汤培养基，且不加指示剂, 观察是否浑浊生长为指标。 大肠杆菌与非大肠杆菌生化鉴别 靛 基 质 MR　 VP 枸椽酸盐 鉴定(型别) + + - - 典型大肠杆菌 - + - - 非典型大肠杆菌 + + - + 典型中间型 - + - + 非典型中间型 - - + + 典型产气肠杆菌 + - + + 非典型产气肠杆菌 大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌,发酵乳糖产酸产气,IMViC试验为＋＋－－或－＋－－,再根据LST肉汤阳性管数查MPN表,报告每克(毫升)样品中大肠杆菌MPN值。 葡萄糖苷酶荧光法 原理：大肠杆菌中的β-葡萄糖苷酶可降解培养基中4-甲基伞形酮- β-D葡萄糖苷酸（MUG），并释放4-甲基伞形酮荧光物质（4-MU），该物质在紫外灯（波长366nm）下会显现蓝色荧光特点。 ? 检样25g ↓ 稀释（三个连续的稀释度，如10-1，10-2，10-3） ↓ 接种（每个稀