高中生物选修三专题一1.1.DNA重组技术的基本工具 .pptVIP

* 选修三-专题一 基因工程基因工程的基本原理和技术 任课教师：陈楚恒 2013.04 回顾基因工程的概念，完成学案上表格的填写 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 结果 DNA重组技术 体外 DNA DNA分子水平 新的生物类型和生物产品 温故而知新，复习引入 中国自主研制转基因抗虫棉 抗虫棉 普通棉花 培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤二： 关键步骤三： 关键步骤一： 抗虫基因与质粒“缝合” 抗虫基因进入棉花细胞 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 目的基因 受体细胞 选修三 §1.1.1 DNA重组技术的基本工具 “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 “分子缝合针”—— DNA连接酶 “分子运输车”——载体 关键步骤四： 转基因棉花获得抗虫特性 一、“分子手术刀”— 限制性核酸内切酶 1 名称来源：限制性核酸内切酶，简称限制酶 主要从原核生物中分离纯化。 2 作用：识别特定核苷酸序列，使每条链中 特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 思考题1：磷酸二酯键在哪里？ 脱氧核苷酸 氢键 磷酸二酯键 P 脱氧核糖 碱基 一、“分子手术刀”— 限制性核酸内切酶 1 名称来源：限制性核酸内切酶，简称限制酶 主要从原核生物中分离纯化。 2 作用特点：识别特定核苷酸序列，使每条链中 特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 (1)识别双链DNA中特定核苷酸序列 (2)切割特定序列中的特定位点 3.种类：EcoRⅠ（识别序列为 ， 切割位点是 。） 　 黏性末端　　　　 黏性末端 GAATTC G↓A 思考2、请根据以下四种DNA片段选择相应的限制酶，并画出被对应的限制酶切割后的结果. ① G A T C ② G G A T C C C T A G C C T A G G ③ G G G C C C ④ A A G C T T  C C C G G G T T C G A A 限制酶的种类 识别序列 切割位点 Ⅰ GGGCCC G↓C Ⅱ GGATCC G↓G Ⅲ GATC ↓GATC Ⅳ AAGCTT A↓A Ⅲ Ⅱ Ⅰ Ⅳ 那是不是所有的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端呢？ SmaⅠ （识别序列为 ， 切割位点是 。） 平末端 　　　平末端 4.作用结果： 产生黏性末端或平末端 GGGCCC G↓C 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 如何让两种来源不同的DNA产生同一种末端？这体现酶的什么特性？如何将他们合成重组DNA？ 用同一种限制酶进行切割，体现酶的专一性。让两者的黏性(平)末端黏合起来，就可以合成重组的DNA分子了。 思考3、4 1.分类：E·coli DNA连接酶，T4DNA连接酶 作用：恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 二、“分子缝合针”—— DNA连接酶 T4DNA连接酶 　 T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 T4DNA连接酶 2.连接酶作用 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段，试分析： ①GC… ②AATTC… ③ …GC ④ …CTTAA CG… G… …CG …G (1)其中①和 是由一种限制酶切割形成的 末端， 两者要重组成一个DNA 分子，所用DNA连接酶通常 是 。 （2） 和 是由另一种限制酶切割形成的 末端， 两者要形成重组DNA片段，所用的连接酶通常 是 。 思考5 ③ 平 黏性 T4连接酶 E.coliDNA连接酶或T4连接酶 ② ④ 思考6、DNA连接酶与DNA聚合酶的区别 DNA连接酶作用： （基因工程） 恢复被限制酶切开DNA