高中生物选修一专题5课题2《多聚酶链式反应扩增DNA片段》.pptxVIP

多聚酶链式反应扩增DNA片段 生物组 曹晓琼 地震和海啸 古生物和刑侦破案 分子生物学研究中最强大的实验技术之一 多聚酶链式反应（PCR） 定义：是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。 意义：有效解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题。 应用：广泛应用于医学、个体识别、亲子鉴定、刑侦破案、古生物学、基因克隆和DNA序列测定等各方面。 基础知识 一、PCR原理 在用PCR技术扩增DNA时，DNA的复制过程与细胞内DNA的复制类似。 1.1 细胞内DNA复制条件 参与的组分 在DNA复制中的作用 解旋酶 打开DNA的双链 DNA母链 提供DNA复制的模板 4种脱氧核苷酸 合成子链的原料 DNA聚合酶 催化合成DNA子链 引物 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 引物 引物是一小段DNA或RNA，它能与DNA母链的一段碱基序列互补配对。用于PCR的引物长度通常为20~30个核苷酸。 1.2 细胞内DNA的复制过程 DNA反向平行的双螺旋结构 DNA的复制方向 DNA聚合酶不能从头开始开始合成DNA，而只能从3’端延伸DNA链，因此DNA复制需要引物。 当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的3’端开始延伸DNA链，因此DNA的合成方向总是从子链的5’端向3’端延伸。 多脱氧核苷酸链结构简图 DNA的复制过程 解旋 引物结合：在DNA单链3’端与DNA反向配对结合，确保引物3’端与DNA单链准确配对。 DNA聚合酶结合 子链合成：DNA聚合酶从引物3’端开始，将配对的脱氧核苷酸连接起来。 （DNA聚合酶不但能够催化磷酸二酯键的形成，还具有校对功能。） 1.3 DNA的热变性 1.4 TaqDNA聚合酶 PCR技术的自动化，要求使用耐高温的DNA聚合酶。科学家从水生耐热细菌Taq中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶，大大增加了PCR的效率，使PCR技术趋向自动化，最终成为现代分子生物学实验工作的基本方法之一。 1.5 PCR反应所需条件 DNA模板 两种引物 原料：四种脱氧核苷酸 耐热的DNA聚合酶 缓冲液 PCR仪：自动调控温度的仪器 二、PCR的反应过程 变性：当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链，称为变性。 复性：温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，称为复性。 延伸：温度上升到72℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。 课后作业 1、PCR与生物体DNA复制有何区别？ 2、如果在案件侦破过程中，只 收集到一根毛发，但它所含的遗传信息太少，该怎么办呢？