选修三-DNA重组技术的基本工具-人教版.pptxVIP

专题一 基因工程1.1 DNA重组技术的基本工具 讲课人： 时 间： 班 级： 基因工程与我们 基因工程 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 基因工程又叫DNA重组技术 你还记得基因工程都需要那些工具吗？ ①限制酶——分子手术刀 ②DNA连接酶——分子缝合针 ③载体——分子运输车 一、限制性核酸内切酶 识别序列 例1：EcoRⅠ 一、限制性核酸内切酶 简称“限制酶”。 主要从原核生物中分离纯化出来 能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列并切割 限制酶切割的是什么？ 两个核苷酸之间的磷酸二酯键 切割位点 一、限制性核酸内切酶 例2：SmaⅠ EcoRⅠ和SmaⅠ切割产生的结果有什么不同？ 黏性末端 平末端 一、限制性核酸内切酶 简称“限制酶”。 主要从原核生物中分离纯化出来 能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列并切割 两个核苷酸之间的磷酸二酯键 产生 黏性末端和平末端 二、DNA连接酶 连接的是什么？ 连接的原则是什么？ 连接磷酸二酯键 连接的两个末端需遵循碱基互补配对原则 末端有两类，连接他们的酶会相同吗？ 黏性末端 平末端 二、DNA连接酶 1、E·coli DNA连接酶 2、T4 DNA连接酶 从大肠杆菌中分离得到，只能连接黏性末端。 从T4噬菌体中分离得到，既能能连接黏性末端，也能连接平末端。 （连接平末端成功概率低） 三、载体 将外源基因送入受体细胞。 常用的载体有质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 质粒 拟核中的DNA 质粒 独立与拟核DNA之外的、具有自我复制能力的环状DNA分子。 质粒 复制原点 酶切位点 标记基因 条件： ①一至多个酶切位点，供外源基因插入其中； ②在宿主细胞中自我复制，提供大量目的基因； ③有标记基因，供重组DNA的鉴定和筛选； ④对宿主细胞无害。 标记基因 例如：氨苄青霉素抗性基因 含氨苄青霉素 含标记基因 不含标记基因 死亡 存活 ——筛选鉴定 练习： 1、下列四条DNA分子，彼此间具有互补粘性末端的一组是（ ） A. ① ② B. ② ③ C. ③ ④ D. ② ④ A 2、回忆DNA连接酶相关知识，回答下列问题： （1）作用：恢复被______切开的两个脱氧核苷酸之间的____________。 （2）分类 ①一种是从大肠杆菌分离得到的____________。只能够“缝合” ________。 ②另一种是从大肠杆菌分离得到的，称为______。既能够“缝合”________，又能够“缝合” ______。 限制酶 磷酸二酯键 黏性末端 黏性末端 平末端 T4DNA连接酶 练习： E·coli DNA连接酶 练习： 3、如图，两个核酸片段在适宜条件下，经X酶的催化作用，发生了下述变化，则X酶是（ ） A.DNA连接酶 B.RNA聚合酶 C.DNA聚合酶 D.限制酶 A 4、载体必备条件： （1）必须有一个或多个_______________，以便目的基因插入载体中。 （2）必须能够在受体细胞内稳定保存并具备_________的能力，或整合到受体细胞的染色体DNA上，随染色体DNA进行同步复制，以便目的基因稳定遗传。 （3）必须带有_________，以便重组后进行重组DNA的鉴定和选择。 （4）必须是______的，不会对受体细胞有害。 限制酶切割位点 自我复制 标记基因 安全 练习： 练习： 5、下列有关质粒的叙述中正确的是（ ） A．质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器B．质粒是细菌细胞质中能够自主复制的小型环状DNA分子C．质粒只有在导入宿主细胞后才能在宿主细胞内复制D．细菌质粒的复制过程一定是在宿主细胞外独立进行的 B 练习： 6、基因的运输工具—运载体，必须具备的条件之一及理由是（ ） A.能够在宿主细胞中稳定的保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因 B.具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达 C.具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件 D.能够在宿主细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选 A 7、下列哪一项不是基因工程中最基本的操作工具（ ） A.限制酶 B.DNA连接酶 C.DNA聚合酶 D.运载体 C 练习： 8、在基因工程中，科学家所用的“分子手术刀”“分子缝合针”和“分子运输车”分别指（ ） A.大肠杆菌病毒、质粒、DNA连接酶 B.噬菌体、质粒、DNA连接酶 C.DNA限制酶、RNA连接酶