DNA loading buffer的基本知识.docVIP

takara的DNA loading buffer的基本知识 Takara DNA Loading Buffer 6×Loading buffer:30mM EDTA36%(v/v) Glycerol0.05%(w/v) Xylene Cyanol FF0.05%(w/v) Bromophenol Blue主要用于DNA电泳10×Loading buffer:30mM EDTA50%(v/v) Glycerol0.25%(w/v) Xylene Cyanol FF0.25%(w/v) Bromophenol Blue主要用于RNA电泳 10 X loading buffer中仅有色素溴酚蓝（Bromophenol Blue)一种染料（浓度0.05%）； 6 X loading buffer中含色素溴酚蓝（Bromophenol Blue)、二甲苯腈蓝FF（Xylene Cyanol FF)两种染料（浓度都是0.05%） 在琼脂糖凝胶（0.5% ~ 1.4%）中溴酚蓝约Bromophenol Blue与300 bp的双链线状DNA的迁移速度相同， 二甲苯腈蓝FF则与4 kbp的双链线状DNA的迁移速度相等 /qcp_0451/blog/static/136047555201001325248891/ 另一说法是： 6Xloading buffer是用来上样的；10Xloading buffer是stop buffer，是停止酶促反应的，如果一定要用10Xloading buffer的上样当然也可以，唯一要注意的是：10Xloading buffer中多了一样SDS，它会使酶类如taq酶变性，以PCR产物为例，在电泳泳道上会产生一片弥散，如果电泳跑的距离短，和多出来一条带没有什么区别（大概1000bp左右）。 PCR电泳时loading buffer的作用 两个作用：1、里边的成分甘油帮助样品沉降入点样孔中，防止样品到处漂2、里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯青FF起到指示的作用，溴酚蓝条带的位置差不多相当于20bpDNA片段，二甲苯酚条带的位置相当于2KbpDNA片段。。。跑在最前面的是溴酚蓝。。。另外，有的Buffer是加有SDS的，一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。 关于条带的大小与电泳的时间的长短以及胶的浓度大小有关，电泳时间越长，溴酚蓝的条带的位置越小，40分钟大约是不到几十bp的样子；胶的浓度大，溴酚蓝条带大小就越大；一般电泳30分钟，1.5%的胶，溴酚蓝条带大小一般为100左右的样子；二甲苯青FF条带大小也是与电泳时间胶浓度有关，一般大小为2kb左右。 核酸电泳常用的指示剂有溴酚兰和二甲苯青。溴酚兰在碱性液体中，呈紫兰色，在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中，溴酚兰的迁移率分别与1Kb、 0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同.二甲苯青的水溶液呈兰色，它在 1%和1.4%琼脂糖中电泳时，其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似。\ 说明书:6×Loading buffer:30mM EDTA36%(v/v) Glycerol0.05%(w/v) Xylene Cyanol FF0.05%(w/v) Bromophenol Blue主要用于DNA电泳10×Loading buffer:30mM EDTA50%(v/v) Glycerol0.25%(w/v) Xylene Cyanol FF0.25%(w/v) Bromophenol Blue主要用于RNA电泳