南京大学医学院附属鼓楼医院.doc

南京大学医学院附属鼓楼医院 医学检验中心 Center of Laboratory Science Affiliated Gulou Hospital,Medical college of Nanjing University 活化血小板检测操作程序 编 号：Sop-CL-025 日 期：2004-10-01 版 本：第二版 第 1 页 　共 2 页 一、目的： 保证流式细胞仪检测外周血活化血小板的工作质量，旨在保证活化血小板检测正确的操作程序，以控制检测结果的精确度与可比性。 二、修改程序： 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任），方可改动。 三、适用范围： 外周血活化血小板检测。 四、溯源： 美国BD公司CD62p、PAC-1产品说明书(CAT:348107、CAT:340507)。 五、实验原理： 静止的血小板其表面无CD62p和PAC-1的表达。当种种原因引起血小板活化时，原本在血小板内部的 颗粒翻转到血小板表面并释放出一些促凝因子，此时，处于是颗粒内部的CD62p暴露于血小板表面，可用流式细胞术检测其是否存在，并血小板被活化了。PAC-1是纤维蛋白原受体，血小板活化时存在于血小板表面，静止血小板表面无些分子表达，它可以与纤维蛋白原结合，导致血小板聚集，最终血栓形成。单克隆抗体结合流式细胞术可确定全部血小板中有多少血小板处于活化状态。 六、主要试剂： 1、CD61- PreCP (美国BD Biosciences公司；CAT:340506)， 2、Mouse IgG1-PE (美国BD Biosciences公司；CAT:349043) 3、Mouse IgG1-FITC (美国BD Biosciences公司；CAT:340442) 4、CD62p-PE(美国BD Biosciences公司；CAT:348107) 5、PAC-1-FITC(美国BD Biosciences公司；CAT:340507) 七、实验操作： 1、标本采集：使用EDTA-K2抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。 2、染色和固定细胞： 标本管编号A，另取流式专用试管两只AT(测定)、AC（对照）。 AT管加入CD61- PreCP、CD62p-PE、PAC-1-FITC各20ul。AC管加入CD61- PreCP、Mouse IgG1-PE、Mouse IgG1-FITC各20ul。 AT、AC管中加入全血5ul，轻轻混均。 置室温，避光孵育15min。 加入生理盐水2.0ml。 3、轻轻混匀后上机检测；分析结果；打印实验报告。 八、参考值： CD62p:2.8%；PAC-1：5.4% 九、临床意义： 心肌梗死、脑血栓形成、深静脉血栓形成等众多血栓性疾病在我国有很高的发病率，也是致死的主要原因。血小板活化是血栓形成的重要环节，检测血小板活化状态可辅助诊断和监视血栓性疾病，对栓前状态的判断有重大意义，在血栓性疾病的治疗过程中也是十分有效的判断药物疗效的指标，特别是使用抗血小板药物。使用流式细胞术可检测血小板活化的百分率，可以及时调整药物、干预治疗方案。一般来说，活化血小板增加，血栓形成的危险也增加。 十、质量控制： 使用枸椽酸钠抗凝真空采血管，顺利抽取静脉血2.0ml，颠倒混均后立即送检。一般要求在30min内检测。 血小板离体后很容易被激活，因此，加样、混合动作要求轻柔。 冬季标本应注意保温。 授 权 人 质 量 主 管 操 作 人 员 生 效 日 期