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PAGE 6 同济医院消化内科 流行病学科研设计报告 幽门螺杆菌的分离培养技术和诊断实验 程 静 0720110035 2008-5-12 成绩：80 诊断性试验的金标准是什么？ 样本量是如何计算的？  研究背景 一、幽门螺杆菌(HP)感染非常普遍,平均世界人口的50%被感染。国家的发达程度越低，感染率越高。 二、HP是慢性胃炎、消化性溃疡、胃粘膜相关淋巴组织（MALT）淋巴瘤的主要致病因素。HP感染与胃癌的关系也越来越受到人们的重视，世界卫生组织已经把HP列为第一类致癌因子。 三、HP的特性：微需氧菌，在5%O2 、10%CO2、 85%N2的环境中生长良好。最适生长温度是37℃ 四、目前,国内外检测HP的常用方法是：快速脲酶试验、组织切片染色镜检，14CO2呼气试验。另外还有血清学检测、分子生物学方法等。但都存在着缺陷。 五、分离培养至少根据HP特殊的生长环境、典型的形态特征、尿素酶的作用三个要素来确诊的。分离培养应该作为微生物感染诊断的金标准。 六、在中华消化学会制订的幽门螺杆菌若干问题的共识意见中，“临床诊断标准”和“科研诊断标准”都没有提到分离培养。 七、HP耐药问题已经越来越严重，是导致根治HP失败的主要原因。国内外研究显示，克拉霉素、甲硝唑、阿莫西林等常规用于根治HP的药物有效率都在下降。目前解决HP耐药的做法是加强用药，联合用药。 研究目的和意义 希望通过我们的研究能促进提高Hp分离培养技术，提高HP诊断的正确率，引起大家对HP分离培养重要性的认识，减少误诊误治率。 通过HP的分离培养和药敏试验可以正确指导临床用药，减少耐药菌株的产生。节约医疗资源，合理用药。提高根治率。 资料和方法 研究对象：入选标准为来同济医院就诊的，有胃、十二指肠疾病主诉的、接受胃镜治疗的病人。年龄、性别不限。 方案设计：在同济医院消化内科门诊就诊的病人中选取符合条件的病人300例，告知病人及家属，填写知情同意书。每位患者做胃镜时在胃窦部取3块活检标本，分别进行分离培养、快速脲酶试验、病理切片检查，同时对病人进行14CO2呼气试验。然后收集上述四种方法的结果，先求出它们各自的总检出率，然后列四格表进行卡方检验，再对结果作统计学分析，比较分离培养方法与目前使用的三种常用检查方法的差异。 检查方法 分离培养：活检标本接种于Hp选择性血培养基上，置于专门设计的微需氧培养罐（含5%O2 、10%CO2、 85%N2 混合气体）内，电脑监测和控制气罐内气体比例，37℃ 病理切片：活检甲醛固定，切片染色，镜下可见Hp典型形态的细菌，报告Hp阳性。 快速脲酶试验：取胃粘膜活检标本一块，置于快速脲酶制剂内，按制剂说明1min内试剂变红色，即判断为HP阳性。 14CO2呼气试验：是脲酶依赖性体内试验之一。嘱病人空腹，用温开水口服1粒14C-UB，静坐15min后， 收集数据，对结果作统计分析：首先对四种诊断方法总检出率作统计，再分别将分离培养方法与目前常用的病理切片、快速脲酶检测、14CO2呼气试验三种诊断方法一一作比较，对它们之间检出率的差异显著性作卡方检验。 技术路线 存在问题 成功地分离培养幽门螺杆菌（HP）是本研究的关键。 HP是个特殊的微生物，为微需氧菌，分离培养不同于一般细菌或厌氧菌，目前还没有成熟的分离培养技术，我们的研究还处于探索阶段，需要提供特定的恒定的环境，还要考虑杂菌生长，如霉菌等。这些均需要反复实验，逐步探索！根据国内外成功培养经验，以及实验室设施技术的日益改进，分离培养幽门螺杆菌还是具有一定的可行性的。关键是如何形成成熟的培养技术，并把它推广应用于临床实践，还有一段艰辛的路要走！需要我们不懈地努力！