中国仓鼠卵巢细胞（CHO-S）.PDFVIP

中国仓鼠 卵巢细胞 (CHO-S) 细胞介绍 贴壁生长及悬浮生长均可（用于蛋白表达时，应使用悬浮生长状态，此时细胞生 长状态更好，比表面积更高，生物反应器中的传质、传热效率更高，同时也可提 高生物反应器空间使用效率。工业上大规模生产单抗，重组蛋白，大部分使用悬 浮培养法来生产） 细胞特性 1 来源：中国仓鼠 2 形态 ：成纤维细胞样 3 含量：1x10 6 个/mL 4 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性 5 规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装 运输和保存 ：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后 立即转入液氮冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细 胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。 细胞用途：仅供科研使用。 细胞培养步骤 一． 培养基 及 培养 冻存 条件准备： 1）培养基信息：EX-CELL CD-CHO CHO Serum-free Medium,Chemically Defined(Sigma-Aldrich,货号：24361C) 添加物： L- 谷氨酰胺（Sigma-Aldrich,货号：G8540-25G） Anti-Clumping Agent(Gibco，货号：01-0057AE) 备注 ：CD-CHO CHO Serum-free Medium 请按照培养基配制说明书配制，L-谷氨酰 胺配制浓度为 200mM，工作浓度为 8mM （即稀释25 倍，如 500ml CHO Serum-free Medium 中添加 20ml 200mM L-谷氨酰胺，抗结团剂使用为 1%，即 500ml CHO Serum-free Medium 中添加 5ml 抗结团剂） 2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄氏度，培养箱 湿度为 70%-80%。 3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。 二． 细胞 处理 ： 传代、转染、建库及实验室规模小试方法： 赛百慷（上海）生物技术股份有限公司提供的 CHO-S 细胞为已驯化的细胞，具有 良好的适应悬浮生长及适应无血清培养基生长特性。 传代 方法： 1.10cm 皿中培养：使用计数器（计数器或者血球计数板计数）计数，接种密度 为 3×10 5 个细胞/ml 接种于提前 37℃预热的新鲜培养基中（建议培养基取 7- 8ml， 此时细胞生长状态较好），置于摇床上生长，转速为 120-130rpm，湿度为 70- 80%， 5%二氧化碳，温度为 37℃。 2.培养约 2-3 天，细胞密度达到 1×10 6 个活细胞/ml 时，应 1000rpm，25℃离心 5min，离心后计数（此时应稀释），然后接种密度为 3×10 5 个细胞/ml 接种于提 前 37℃预热的新鲜培养基中。细胞数目足够时，可冻存。 也可选择 125ml 或者 250ml 摇瓶中培养细胞。（注意细胞培养液体积一般在总体 订购热线：4008-898-798 021 QQ：2881505690 监督电 话 积的五分之一，如在 125ml 摇瓶中加入 25ml 培养物，应注意在摇瓶中培养细胞 时应将瓶盖稍微拧松，以便于气体交换，同时也不宜拧得过松，防止细胞污染） 转染 方法： 在连续 5 代细胞密度未超过 2×10 6 个活细胞/ml 时，可以使用 FreeStyle Max 转 染试剂（Gibco，货号：16447）在 CD CHO Serum-free Medium 中直接转染。（注 意：Anti-Clumping Agent 会干扰 FreeStyle Max 转染试剂转染效率，同时也会干 扰 其他脂质体型转染试剂的转染效率） 建库方法 ： 若需要建库，可将细胞接种于 125ml 摇瓶中（接种密度为 3×10 5 个细胞/ml，总 体积为 25ml），此方法同样适用于稳定表达所需要蛋白的细胞株的建库工作。建 库时，需要先建初级库（master bank）（一般为 10 支，每支细胞总数不少于 4.5 ×10 7 个细胞），此步骤结束后，从冻存的初级库中取出一支复苏，按照同样步骤 建次级库（working bank）（相同的，一般为