(讲课)基因工程的基本操作程序.pptVIP

3.如何构建基因文库或构建基因文库遵循原则： 基因组文库和部分基因组文库(cDNA文库)比较： 5.如何从基因文库中寻找目的基因： 编码区含有： 能够编码蛋白质的序列(外显子) 不能编码蛋白质的插入序列(内含子) 例、多聚酶链式反应（PCR）是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述三十多次循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。下列有关PCR过程的叙述中不正确的是：（ ） 例、 科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂的过程和不懈的努力，才获得成功。起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子（抗虫基因首端），导人棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子（抗虫基因末端），导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。由以上过程推知，基因表达载体应具备的结构是 （ ） 例、为从根本上解决水稻中的高植酸问题，可将植酸酶基因导入水稻，培育低植酸转基因水稻品种。下图是获取植酸酶基因的流程。 ②B过程需要的酶是????????? ； 2、将目的基因导入动物细胞： 基因探针：指带有放射性标记，能与目的基因互补的已知核苷酸序列的一段单链DNA或RNA。 基因探针的条件： 单链DNA或RNA； 有易被检测的标记； 高度特异性。 基因探针种类： 基因DNA探针； cDNA探针； RNA探针。 方法: 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： 例、2009年10月，我国自主研发的转基因抗虫水稻“华恢1号”获得农业部颁发的安全证书。下图表示该抗虫水稻主要培育流程，据图回答：? （1）④过程应用的主要生物技术是?????? ???。 2）组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造。下图是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图（部分基因及部分限制性内切酶作用位点），据图分析： ?①人工改造时，要使抗虫基因表达，还应插入????????? ?②人工改造时用限制酶Ⅱ处理，其目的是：第一，去除质粒上的????????? 基因，保证T－DNA进入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长；第二，使质粒带有单一限制酶作用位点，有利于????????? 。第三，使质粒大小合适，可以提高转化效率等。 ③若用限制酶Ⅰ分别切割改造过的理想质粒和带有抗虫基因的DNA分子，并构成重组Ti质粒。分别以含四环素和卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞，观察到的细胞生长的现象是在含????????? 能够生长，而在含????????? 中能生长。? 答案：（1）植物组织培养　 （2）①启动子　　②tet和tmr　目的基因（或外源DNA）准确插入　　③卡那霉素的培养基　四环素的培养基? 解析：（1）④过程表示植物细胞组织培养成植物体。（2）①基因表达载体应含有启动子、终止子、目的基因、标记基因。②从图看出限制酶Ⅱ能破坏tet和tmr。③由图看出限制酶Ⅱ已将四环素抗性基因破坏。 据图回答： ①图中基因组文库????????? （填“小于”、“等于”或“大于”）cDNA文库。 ③目的基因Ⅰ和Ⅱ除从构建的文库中分离外，还可以分别利用图中????????? 和????????? 为模板直接进行PCR扩增，该过程中所用酶的显著特点是????????? 。 逆转录酶 DND cDNA 耐高温 三、将目的基因导入受体细胞——转化： （一）转化概念： （二）方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 农杆菌特点及转化原理： 农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有感染能力。当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，这时农杆菌中的Ti质粒上的一段特殊的T-DNA（可转移的DNA）可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。根据农杆菌的这种特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞，并将其插入到植物细胞中染色体的DNA上，使目的基因的遗传特性