第四章抗生素效价的微生物检定法 第八节 一剂量法(选讲内容) 第九节.pptVIP

第四章：抗生素效价的微生物检定法第七节　三剂量法第八节 一剂量法(选讲内容) 第九节 浊度法技术 授课人:汪穗福(高级讲师) 苏惠虹(助理讲师) 广州市医药中专学校 第七节　三剂量法 所谓三剂量法是指用高、中、低三种剂量，在同一条件下比较抗生素标准品与供试品溶液产生的抑菌圈大小，以求得供试品效价的方法。三剂量比二剂量多一种抗生素剂量，能增加结果的准确程度。在选用三剂量法时，要求剂量的大小一定要在直线关系的范围内。在测定标准品的准确效价时通常选用三剂量法. 一、效价计算公式 　PT=lg-1[0.1292(T3+T2+T1-S3-S2-S1)/(S3+T3-S1- T1)] ×100％ 　　　　　　 (4－10) 二、测定方法 按《中国药典》(2005年版)规定制备试验菌悬液，培养基，并配制抗生素标准品及检品的高、中、低三种剂量的溶液，三种溶液的剂距为1:0.8，标准品中剂量的抑菌圈直径为15～18 mm。选用的双碟不得少于6个，在每一双碟中间隔的3个不锈钢小管中分别滴加高浓度、中浓度、及低浓度的标准品溶液，其余3个小钢管中分别滴加相应的高、中、低三种浓度的供试品溶液。经培养后，精密量取各抑菌圈直径，经可靠性测定后，符合规定，按效价计算公式计算效价。如不符合规定，予以重试。 三、效价计算和误差分析 可参考《中国药典》(2005年版)附录内容的例题。 第八节 一剂量法(选讲内容) 一、设计原理与计算公式 本法系用已知效价的标准品溶液制备出标准曲线，并在同样条件下测出供试品溶液所致抑菌圈直径的平均值后，再求出其与标准品溶液所致抑菌圈直径平均值之差，即可在标准曲线上直接得供试品溶液的浓度，换算出效价，故称标准曲线法。由于检定标准品和供试品都采用一个剂量，故也称一剂量法。 由公式(4－2)：lgM=(1/9.21DT)r2＋lg(C.4πDTH)可知，抗生素总量的多少受最低抑菌浓度(C)培养基厚度(H)扩散系数(D)和细菌生长时间的影响；同时由公式(4－1)r2=4DT［lnM-lnC-ln(4πDTH)］也可看出抑菌圈的大小也受C，H，D，T的影响 。所以在效价测定时应消除这些影响，才能得到准确的结果。消除这些影响，可用相对效价设计法，即用标准品同时作对照测定的方法。其计算方法如下：设标准品的抑菌圈直径为 S1：标准品的总量为M。 供试品的抑菌圈直径为T1:供试品的总量为M’。 则 lgM=(1/9.21DT)S21+lg(C.4πDTH) (4－11) lgM’=(1/9.21DT)T21+lg(C.4πDTH) (4－12) 因lg(C.4DTH)为截距，在同一双碟上其数值是相等的，因此两式相减时可以消掉并得到 lgM’/M=(1/9.21DT)(T21-S21)　 　　(4－13) lgM’/M为供试品与标准品的效价比对数，令θ=M’/M则： lgθ=(1/9.21DT) (T21-S21) 　 (4－14) 因(1/9.21DT)直线的斜率，故供试品与标准品的效价比对数即等于斜率乘供品的抑菌圈直径的平方与标准品抑菌圈直平方之差。此即管碟法的标准曲线法的基础。 根据上述原理。可知效价与抑菌圈半径的(或直径的)平方成直线关系，其直线方程式为lgY＝aX＋b。当供试品与标准品对照测定时，b可消掉，成为lgθ＝a（X，－X），也即效价的对数等于斜率供试品与标准品的抑菌圈直径之差数。标准曲线测定效价便以基础。即: lg效价=(斜率)×(供试品抑菌直径-标准品抑菌圈直径) 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　(4－15) 在上式中只要知道斜率，则可求出lg效价。为了消除测定碟间的差异，在每一双碟的加菌培养基上置6枚不锈钢小管（简称小钢管），间隔的3枚内中加入标准品的某一特定浓度Ck，它们所产生的抑菌圈直径平均值为，另3枚内加入标准 品的中心浓度Co，它们所产生的抑菌圈直径平均值为0。 令fk=yk－y0 　　　　　　(4－16) 这样采用的自身对照方法，当某一碟的条件使抑菌圈偏大时，k和0都将按相似的程度偏大，反之亦然。因此fk在碟间的差异必然小于k在碟间的差异。所以f值亦应与抗生素浓度的对数值呈直线的函数关系。即f=ax+b，据此可只制备标准曲线。 二、标准曲线制定与测定方法 1. 标准曲线制