植物细胞工程总结.docVIP

PAGE PAGE 9 绪论 1, 细胞工程：是应用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的实验方法或技术，在细胞水 平上研究改造生物遗传特性和生物学特性，以获得特定的细胞、细胞产品或新生物体的有关理论和技术方法的学科。广义的细胞工程包括所有的生物组织、器官及细胞离体操作和培养技术。狭义的细胞工程是指细胞融合和细胞培养技术。 根据研究对象的不同，高等生物的细胞工程分为动物细胞工程和植物细胞工程。动物细胞工程包括细胞培养技术（包括组织培养、器官培养），细胞融合技术，胚胎工程技术（核移植、胚胎分割等），克隆技术（单细胞系克隆、器官克隆和个体克隆）。植物细胞工程包括植物组织、器官培养技术，细胞培养技术，原生质体融合与培养技术，亚细胞水平的操作技术等。 2, 植物细胞工程：以植物组织细胞为基本单位，在离体条件下进行培养、繁殖或人为的精细操 作，使细胞得某些生物学特性按人们的意愿发生改变，从而改良品种或创造新物种，或加速繁殖植物个体，或获得有用物质的过程称… 植物细胞工程的应用： 利用细胞融合技术，克服远缘杂交不亲和性。 利用培养变异，筛选优良的突变体。 倍性育种，缩短育种年限。 4, 离体种质保存。 5, 细胞培养生产有用的物质。 第二章 一， 实验室设置及内部设备 实验室建设应考虑的问题： 1、实验的性质 2、实验室的规模 细胞工程实验室: 基本实验室:准备室、无菌操作室、培养室 贮藏室 辅助实验室：细胞学实验室、生化分析实验室 温室 1、准备室 完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、 配制、培养基分装及高压灭菌；器皿、材料的洗涤等工作。 主要设备 纯水器 工作台 药品厨 天平 电磁炉 冰箱 玻璃器皿 酸度计 高压灭菌锅 干燥箱等 2、无菌操作室 （接种室） 用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。 接种室应用推拉门，设有缓冲间，面积2m2为宜。进入接种室前更衣换鞋，减少带入接种室杂菌。 接种室主要设备 超净工作台 ：每次实验前要用紫外灯灭菌20min，关掉紫外灯开始工作，工作过程中注意一直开着吹风机。 无菌操作用具： 离心机 细胞融合仪 3、培养室 用于接种材料的培养。培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。 控制：温度、光照、湿度。 培养室主要设备：培养架 空调 时控器 自动开灯、关灯温度自动记录仪 摇床 二 ，培养基 1，培养基的种类 培养基根据其态相不同分为固体培养基与液体培养基。根据培养物的培养过程，培养基分为初代培养基和继代培养基。根据作用不同，培养基为诱导培养基、增殖培养基和生根培养基。 根据营养水平不同，培养基分为许多种,常用如下： （1） MS培养基：富盐平衡培养基（还有LS、BL、ER） 特点: ①无机盐浓度较高，元素比例合适，是较稳定的平衡溶液；②微量元素种类齐全； ③营养丰富 。 （2）B5培养基 ：高硝态氮培养基（还有N6和SH培养基） 特点: ①硝酸钾含量高； ②氨态氮含量低； ③ VB1含量较高。 （3）N6培养基：高硝态氮培养基 特点：硝态氮含量高，氨态氮含量较低。 （4）White培养基：低盐培养基（还有WS、HE、改良Nitsch等 特点：无机盐含量低，有机成分也很低，适于生根培养。 （5）KM-8P培养基： 特点:有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质融合的培养。 培养基成分：水 无机盐 有机成分 植物激素 培养物支持材料 辅助性物质 2，植物激素的应用规律 ①先Aux后CKs处理,有利于细胞分裂但不利于细胞分化。容易产生多倍体细胞（核分裂和胞壁形成不同步所至）， cks有利于胞壁形成。 ②先CKs 后Aux处理，细胞分裂也分化(可能是内源生长素起作用) ③ Aux 和CKs 同时处理，分化率提高。 Aux与CKs的比值改变形态建成的方向。 高 有利根分化，抑制芽形成； Aux / CKs 适中 促进愈伤组织生长； 低 有利芽分化，抑制根形成； 在组织培养中生长调节物质的使用浓度，因植物的种类、部位、时期、内源激素等的不同而异, 培养基配制：1、确定配方 2、移母液 3、定容 4、称蔗糖 5、调PH值（用0.1MNaOH或HCl调PH值为5.8） 6、培养基熬制（加