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ACRO Online 小课堂-SPR 技术分享 非常感谢各位小伙伴对ACRO Online 小课堂的关注和支持，第一讲SPR 技术分享直播 课中及课后有很多小伙伴积极参与并提出了一些问题，我们整理后把对应的分析分享给大 家。当然，这只是我们的分析，如果大家有补充的话欢迎发出来我们一起交流。 第一讲 SPR 技术分享直播资料（视频重放、PPT ）直接点击链接即可申请 /meeting -show -mid -130.html 另外，也敬请大家关注我们的ACRO Online 第二讲-抗独特型抗体及其在生物分析中的 应用。 互动问题（Q）和ACRO 分析(A) Q1: 请问有什么软件计算KD ？ A1: 我们一般都用Biacore 自带软件进行分析，有些文献中也会提到有公式计算，可以参考 一下文献。 Q2: 不同浓度包被后，测的 KD 差异很大怎么处理？你们做过包被不同的浓度 FC 受 体，得到 KD 值不一致现象呢？ A2: 我们做 Fc 受体系列蛋白一般是用捕获法做的，是根据公式计算的捕获量，不同包被量 会影响最终的KD 值的。 Q3: 在pH7.4 的条件下抗体与FcRn 的亲和力Biacore 分析，有成熟的protocol 吗？ A3: 我们是在 pH6.0 条件下试验的，因为抗体跟 FcRn 的结合在生理条件下就是 pH6.0， protocol 是有的，而且是有不同的方法，均可以在官网申请。 Q4: C1q 咱们有产品吗？抗体与C1q 的Biacore 分析有方法参考吗？ A4: 补体产品我们正在研发中，后续有数据会分享给大家。 Q5: FcRn 用动力学拟合和稳态拟合得到的KD 是不一样的，那种方法更好？ A5: FcRn 与抗体亲和力测定是“快上快下”型的，建议用稳态进行拟合。 Q6: t200 检测上清不纯化可以做 koff ranking 吗？一般最低要求纯化后的抗体的纯度 是多少？ A6: 可以的，Biacore 是可以做培养基中抗体的koff ranking，纯化的抗体我们要求尽量纯度 高一些，可以提到数据的准确性，如果实在达不到纯度，建议做ligand。 Q7: 如果flow 的抗体对芯片非特异性结合太高怎么办，SA 芯片，capture avi receptor ， flow antibody ，binding to reference 很高，有什么buffer 推荐么？ A7: 看一下抗体的纯度，以及抗体 buffer 成分，也就是 formulation ，建议将抗体进行脱盐 处理. Q8: 请问稳态结合也是同一个样品做的吗？很多分析物进行筛选的时候也可以用稳态 拟合吗？ A8: 可以根据配体和受体或者配体和抗体做出来的结果，如果是快上快下的话也是可以稳态 拟合的。 Q9: Biacore 所测的Fc 受体与细胞水平的结果吻合度有多少？ A9: 这个我们还没有相关的细胞数据，建议可以查阅一下文献。 Q10: 除了亲和力测定之外，SPR 还可以做哪检测？ A10: 亲和力一般是进行一些表征。SPR 可以初步筛选克隆，定量实验，热动力学等，ACRO 做筛选和亲和力测定相对比较多。 Q11: 快上快下Fc 受体蛋白高浓度怎么降低非特异性结合？ A11: 这位老师说的应该是捕获抗体，分析物是 Fc 受体蛋白，这种情况我们可以 Fc 受体蛋 白的纯度、buffer 是否有影响，也可以更改一下实验方案（捕获 Fc 受体蛋白、抗体作为分 析物）。 Q12: 请问为什么anti-his 方法做的曲线会在结合稳定段下飘？ A12: 高浓度会有一定程度的下降，在实验过程中遇到高浓度在结合稳定段下飘，捕获量、 浓度的优化调整。 Q13: 我们为什么不用protein L 芯片捕获抗体，分析物走受体蛋白？ A13: 这样也是可以的，Fab 也是可以的，这个Fc 受体蛋白作为分析物的话用量会稍微大一 些。 Q14: 如何系统的优化SPR 的条件? A14: 系统条件的优化包括的范围非常广，比如配体优化、分析物优化、分析方法优化、再 生试剂条件优化、非特异性条件优化等。其中配体优化包括最合适pH 值、buffer 成分、固 定量等；分析物优化：buffer、浓度范围、流苏调整、结合时间、解离时间等；还有其他的 很多方面。 因为这个问题所要解释的内容太多，想要了解的小伙伴可以直接跟我们联系