改性聚N-异丙基丙烯酰胺协助蛋白质体外复性分析.docxVIP

浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 摘要 摘要 蛋白质体外重折叠复性技术已成为目前基因工程蛋白质产业化的瓶颈问题。 开发新型、高效，同时又易于操作和回收的蛋白质体外复性添加剂成为近年来的 研究热点之一，其中聚N．异丙基丙烯酰胺(肿叮PAM)作为一种温敏型聚合物受 到了研究者的极大关注。本文以温敏型PNIPAM类聚合物作为研究对象，采用 共聚、表面接枝以及特定功能基团引入等方法对聚合物进行了改性，并对改性后 PNIPAM聚合物协助蛋白质体外复性过程进行了研究。 采用反相悬浮法合成一系列具有不同丙烯酸钠含量的粒状共聚凝胶 P(NIPAM．CO．SA)，对凝胶粒子的形态以及温敏性能进行了研究。将共聚凝胶用 于亲水性较强的溶菌酶体外复性，考察了各种复性条件对于溶菌酶复性过程的影 响。当蛋白浓度为250 gg／ml时，P(NIPAM．CO—SA)(√懈％)的加入可以使复性 收率从稀释复性的55．6％增加到76．5％。共聚凝胶重复利用5次后溶菌酶的活力 回收率仍有61．5％。通过对复性蛋白的结构进行分析，确定共聚凝胶通过有效