甘蓝型油菜Bna.TTG2基因家族功能分析.docx

研究生优秀毕业论文 甘蓝型油菜Bna．TIG2基因家族功能分析目录 甘蓝型油菜Bna．TIG2基因家族功能分析 目录 摘要 ．．i Abstract ． ． ． ． ． ． ． iii 缩略语表(Abbreviations) v 1前言 l 1．1转录因子概述 1 1．1．1植物转录因子的结构特点及作用机制 。1 1．1．2植物转录因子的分类 ．．2 1．2植物转录因子在植物物胁迫中的作用 3 1．3植物WRKY类转录因子研究进展 ．5 1．4植物耐盐机制概述 8 1。5植物激素在植物生长及非生物胁迫中的作用 9 1．5．1生长素在植物生长及非生物胁迫中的作用 ．．9 1．5．2脱落酸在植物生长及非生物胁迫中的作用 10 1．6本研究的目的和意义 一11 2材料和方法 ll 2．1实验材料 ．1l 2．1．1植物材料 11 2．1．2生化试剂 12 2．1-3实验仪器 12 2．1．4主要试剂的配置 13 2．2实验方法 ，14 2．2．1植物Ⅸ叮A提取及Southern杂交 14 2．2．2 Bna．TTG2基因家族的克隆 ～16 2．2．3 Bna．TTG2基因家族生物信息学分析 ．．17 2．2．4 Bna．YIG2基因家族及AtTrG2基因表达载体构建 18 2．2．5 Bna．TTG2基因家族启动子克隆及GUS载体构建 18 2．2．6拟南芥及甘蓝型油菜的遗传转化及阳性鉴定 20 2．2．7 Bna．TTG2启动子转化植株的GUS染色分析 20 万方数据 华中农业大学2014届博士研究生学位(毕业)论文2．2．8 华中农业大学2014届博士研究生学位(毕业)论文 2．2．8 Bna．乃1G2基因家族亚细胞定位分析 ．．20 2．2．9植株表皮毛性状考察 21 2．2．10植物耐盐性鉴定 ．．21 2．2．11植株渗透胁迫鉴定 ．22 2．2．12植株离子含量测定 ．22 2．2．13植物淀粉及内源激素含量测定 ．22 2．2．14淀粉酶活性测定 ．22 2．2．1 5拟南芥叶片半薄切片 ．23 2．2．16 Real．time PCR表达分析 ．．23 2．2．17转录激活、酵母双杂交及酵母单杂交分析 ．23 2．2．18双荧光酶素报告(DLR)系统分析 。25 2．2．19双分子荧光互补实验 26 2．2．20 ABA处理种子萌发实验 ．28 2．2．2l葡萄糖处理实验 28 3结果与分析 28 3．1 Bna．TTG2基因家族的克隆、结构及表达分析 28 3．1．1 Bna．黝基因家族拷贝数分析 ．．28 3．1．2Bna．1TG2基因家族与拟南芥．4tTTG2基因同源性分析 29 3．1．3 Bna．TTG2剪切变异分析 ．．31 3．1．4 Bna．乃b2基因家族表达时空分析 ．．32 3．1+5 Bna．阿∞基因家族亚细胞定位 ．．33 3．1．6 BnaA．TTG2．a．1转录激活／抑制区域分析 34 3．2 Bna．TTG2基因参与植物表皮毛发育调控 35 3．2．1 Bna．TIG2基因家族可以回复拟南芥tt92．J突变体 35 3．2．2 Bna．TTG2蛋白姗KY结构域对于表皮毛发生的影响 38 3．2．3 BnaA．TTG2．口．J，过表达拟南芥及油菜叶片表皮毛数目增加 一38 3．3 Bna．卯1G2基因影响植物生长素介导的盐胁迫响应 40 3．3．1 Bnad．TTG2．a．1过表达拟南芥及油菜对盐过敏感 ．．40 3．3．2盐胁迫下渗透胁迫和离子毒害对过表达植株的影响 41 万方数据 甘蓝型油菜Br垃．TTG2基因家族功能分析3．3．3 甘蓝型油菜Br垃．TTG2基因家族功能分析 3．3．3 BnaA．1YG2．a．1过表达影响拟南芥盐胁迫下淀粉代谢 ．．45 3．3．4盐胁迫改变过表达拟南芥叶片细胞形态 45 3．3．5盐胁迫下过表达植株内源生长素含量降低 47 3．3．6过表达植株盐胁迫下生长素路径相关基因的表达受到影响 48 3．3．7 BnaA．TTG2．a．1可以结合刀妒5和K℃2基因启动子区域 ．．50 3．3．8 BnaA．TTG2．a．1蛋白N端区域对盐胁迫的影响 52 3．4 Bna．ITG2基因可能参与葡萄糖及激素代谢相关的过程 52 3．4．1 BnaA．乃’G2．反J『影响葡萄糖处理下植株苗期形态建成 ．．52 3．4．2 BnaA．1TG2．a．1影响ABA介导的种子萌发 53 3．5 BnaA．TTG2．a．1互作转录因子分析 54 3．5．1全长BnaA．TT(挖．a．1互作转录因子的筛选 54 3．5．2 BnaA．TTG2．a．1互作转录因子BIFC验证 ．．55 3．5．3 BnaA．TTG2．a．1蛋白N端区域在该蛋白与其它蛋白互作中的作用 5