分析化学05-分子荧光光谱法(去磷光).pptVIP

* 3.5 分子荧光光谱法的应用 （3）多组分的荧光测定 利用荧光物质本身具有的荧光激发光谱和发射光谱，实验时可以选择任一波长来进行多组分的荧光测定。 若二组分的荧光光谱峰不重叠，可选用不同的发射波长来测定各组分的荧光强度； 若二组分的荧光光谱峰相近，甚至重叠，而激发光谱有明显差别，这时可选用不同的激发波长来进行测定。 * 3.5 分子荧光光谱法的应用 （1）溶液中单分子行为的研究 2. 其它应用 分子荧光方法利用激光诱导产生超高灵敏度，这已能实时检测到溶液中单分子的行为。这一研究工作受到了广泛的关注。 目前，已观察到溶液中罗丹明6G分子，荧光素分子等及其标记的DNA分子的单分子行为。 * 3.5 分子荧光光谱法的应用 （2）基因研究及检测 DNA自身的荧光效率很低，一般条件下几乎检测不到DNA的荧光。因此，人们常选用某些荧光分子作为探针，通过探针标记分子的荧光变化来研究DNA与小分子及药物的作用机理，从而探讨致病原因及筛选和设计新的高效低毒药物。目前，典型的荧光探针分子为溴化乙锭（EB）。此外也使用Tb3+，吖啶类柒料，钌的配合物等。在基因检测方面，已逐步使用荧光柒料作为标记物来代替同位素标记，从而克服了同位素标记物产生的污染、价格昂贵及难保存等的不足。 2. 其它应用 * 5.3.2 影响荧光强度的因素 一般地，具有强荧光的分子都具有大的共轭π键结构，同时，给电子取代基，刚性的平面结构均有利于荧光的发射。 因此，分子中至少具有一个芳环或具有多个共轭双键的有机化合物才容易发射荧光，而饱和的或只有孤立双键的化合物，不呈现显著的荧光。 结构对分子荧光的影响主要表现在以下几个方面： 1. 分子结构 * 5.3.2 影响荧光强度的因素 (1) 共轭效应 产生荧光的有机物质，都含有共轭双键体系，共轭体系越大，离域大π键的电子越容易激发，荧光越容易产生。 化合物 苯 萘 蒽 丁 省 戊 省 λexmax(nm) 205 286 365 390 580 λemmax (nm) 278 321 400 480 640 ?F 0.11 0.29 0.46 0.60 0.52 芳香族化合物容易发生荧光，能发生荧光的脂肪族和脂环族化合物极少。 * 5.3.2 影响荧光强度的因素 (2) 结构刚性效应 可降低分子振动，减少与溶剂的相互作用，故具有很强的荧光。 实验表明，具有刚性结构的分子容易产生荧光。若荧光染料吸附在固体表面上，由于固体表面提供的附加刚性，也会使荧光增强。 * 5.3.2 影响荧光强度的因素 芴 联苯 ?f=1.0 ?f=0.2 * 偶氮苯 杂氮菲 * 5.3.2 影响荧光强度的因素 此外，分子的这种平面刚性结构效应对许多金属配合物的荧光发射也有影响。 如: 8-羟基喹啉本身的荧光强度远比其锌配合物低。 利用这种性质可进行痕量金属离子的测定。 * 5.3.2 影响荧光强度的因素 (3) 取代基效应 给电子基团，如 -NH2、-OH、-OCH3、-NHCH3和 -N（CH3）2等，使荧光增强； 原因：产生了p-?共轭作用，增强了?电子共轭程度，使最低激发单重态与基态之间的跃迁几率增大。 * 5.3.2 影响荧光强度的因素 (3) 取代基效应 ? 吸电子基团，如 -Cl、-Br、-I、-NHCOCH3、-NO2和 -COOH等，使荧光减弱。 原因：n→π*跃迁的摩尔吸光系数、量子产率均低于π→π*跃迁。 π→π*跃迁是有机化合物产生荧光的主要跃迁类型。 * 小结：强荧光的有机化合物具备下特征: ①大的共轭π键结构； ②刚性的平面结构； ③取代基团为给电子取代基。 5.3.2 影响荧光强度的因素 * 5.3.2 影响荧光强度的因素 (1) 溶剂效应 溶剂对荧光光谱的影响主要是由于溶液的介电常数和折射率等因素的作用，这称为一般溶剂效应，这种效应是普遍存在的。 除一般溶剂效应外，溶剂的极性、氢键、配位键的形成都将使化合物的荧光发生变化； 一般地，增大溶剂的极性，光谱红移。这是由于π→π＊跃迁的能量减小，从而使荧光光谱向长波方向移动。 2. 环境因素 * 5.3.2 影响荧光强度的因素 (2) 温度的影响 一般地，随温度降低，溶液中荧光物质的量子效率和荧光强度将增大，并伴随光谱的蓝移。 原因： 温度降低，介质的粘度增大，溶剂的驰豫作用大大减小。 温度升高，碰撞频率增加，外转换的去激发几率增加。 因此，选择低温条件下进行荧光检测将有利于提高分析的灵敏度。 * 5.3.2 影响荧光强度的因素 (3) pH的影响 对于含有酸性或