钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL32的克隆 表达及其在钩端螺旋体抗体检测中的应用.docx

主要英文缩写主要英文缩写词表 主要英文缩写 主要英文缩写词表 英文缩写 英文全称 中文 Amp Ampicillin 氨苄青霉素 Kn Kanamyein 卡那霉素 PCR Polymerase chain reaction 多聚酶链反应 DNA Deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 dNTP Deoxyribonucleoside triphosphate 脱氧核苷三磷酸 ELISA Enzyme～l inked immunosorbent assay 酶联免疫吸附试验 E．coli Escherichia coli 大肠杆菌 LB Luria-Bertani medium LB培养基 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 TEMED N，N。N，N—teramethyl ethylene diamine 四乙基乙二胺 X—gal 5-broma-4一chloro一3一indoly—a—D—galactoside 5一溴一4一氯一3～哼』哚一a—D BCIP 5-bromo—。4—‘chloro—。3 indolyl phosphate 5-溴_4一氯一3_吲哚一磷酸 toluidium AP alkal ine phosphatase 碱性磷酸酶 HRP Horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 PBS Phosphate buffered solution 磷酸盐缓冲液 RNA Ribonucleic acid 核糖核酸 SDS Sodium dodecyl sulfate—polyacryamide gel 十二烷基硫酸钠一聚丙烯 1ectroDhoresiS 酰胺凝胶电泳 EDTA Ethylene diaminetetracetic acid 乙二胺四乙酸 IPTG isopropyl—B—D—thiogalactopyranoside 异丙基硫代一B一半乳糖 WB Western blot 蛋白印迹 TriS Hydroxymethyl aminomethans 三羟甲基氨基甲烷 kDa gi lodalton 千道尔顿 MAT Microscopic agglutination test 显微镜凝集试验 ORF Open reading frame 开放阅读框 bp Base pair 碱基对 学位论文原刨性声明和版权使用授权书学位论文原创性声明 学位论文原刨性声明和版权使用授权书 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究 工作所取得的真实成果。除文中已注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本论文的研究做出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 作者签名(手写)：型醚 导师签名(手写)： 丝星年』月卫日 驷略 年』月盟El 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借 阅。本人授权福建医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库 进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。同时 授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》， 并通过网络向社会公众提供信息服务。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 瞩昔 龆名 浮手 勤) 互p丞 导师签名(手写)： ～一 垒k虹^J ‘～ 筚中 竺堑年上月里F1 中文摘要钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL32的克隆、表达及其在钩端螺旋体 中文摘要 钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL32的克隆、表达及其在钩端螺旋体 抗体检测中的应用 摘要 钩端螺旋体病(简称钩体病)是由致病性钩端螺旋体(简称钩体)引起的一种 人兽共患的自然疫源性疾病。钩体血清型别众多，临床表现多种多样。目前钩体 病血清学的主要检测方法是国家标准即显微镜凝集试验(MAT)，需要培养各种 血清型的钩体活菌，操作繁琐，安全性差且需要暗视野显微镜，无法在基层开展 该项目的检测工作。钩体外膜脂蛋白LipL32是各种致病性钩体中高度保守的抗 原成份，可刺激机体产生中和抗体。因此该抗原有可能应用于抗体检测。 本课题用PCR法扩增致病性钩端螺旋体黄疸出血群(56601株)LipL32蛋 白的全长基因片段，与表达载体pET-30a(+)连接并在大肠杆菌BL2t(DE3)中表达 重组蛋白，Western blot鉴定免疫活性后用电洗脱法进行纯化。纯化后的LipL32 重组蛋白用间接ELISA和夹一OELISA法对不同的人和动物血清进行检测，以MAT为 参照标准进行比