生物化学-核酸2.ppt

核酸的化学基础 1 核酸的化学核酸的发现 1869年：Miescher（瑞士） 脓细胞核：含磷化合物（核素，nuclein） 1889年：Altmann 酵母 动物细胞：含磷化合物（核酸，nucleic acid） 核酸的化学核酸的组成 基本组分 磷酸 戊糖（核糖，脱氧核糖） 碱基 基本组成单位 核苷酸（nucleotide） 戊糖（核糖/脱氧核糖） 碱基 稀有碱基 核苷酸（nucleotide） 核苷与核苷酸 环核苷酸 核苷与核苷酸 核酸的化学核酸的结构 一级结构 多核苷酸链 空间结构 二级结构 DNA RNA 三级结构、三级以上结构 核苷酸的连接 磷酸二酯键 DNA 二级结构 DNA 二级结构 双螺旋 碱基配对与氢键 DNA二级结构的构象 DNA二级结构的构象 DNA 三级结构 染色体（chromosome） 从DNA到核小体 压缩6—7倍从DNA到中空螺线管 压缩约40倍从DNA到染色体 压缩8400多倍 RNA 茎环与发夹 tRNA二级结构 ——三叶草 tRNA三级结构 2 核酸的性质核酸的变性与复性 变性（denature/denaturation） 概念：DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象 化学键变化：维持双螺旋稳定的氢键和疏水键发生断裂，断裂可以是部分的或全部的，可以是可逆的或是非可逆的 化学结构变化：DNA变性改变了其空间结构，不涉及到其一级结构的改变 DNA 变性 DNA的变性因素 加热 极端的pH 有机试剂（甲醇、乙醇、尿素、甲酰胺等） 凡能破坏双螺旋稳定性的因素都可以成为变性的条件 DNA 变性 变性DNA的性质 变性能导致DNA 的一些理化性质与生物学性质发生改变 溶液粘度降低 溶液旋光性发生改变 增色效应或高色效应 变性DNA的性质 溶液粘度降低 DNA双螺旋是紧密的“刚性”结构，变性后代之以“柔软” 而松散的无规则单股线性结构，DNA粘度因此而明显下降 溶液旋光性发生改变 变性后整个DNA分子的对称性及分子局部的构型发生改变，使DNA溶液的旋光性发生变化 增色效应或高色效应（ hyperchromic effect ） DNA变性后，DNA 溶液的紫外吸收增强的效应 增色效应 DNA分子在250－280nm 波长具有吸收紫外光的特性，其吸收峰值在260nm 紫外吸收的结构基础是：DNA分子中碱基间电子的相互作用 双螺旋结构中，有序堆积的碱基“束缚”了这种作用 DNA变性后，双链解开，碱基间电子的相互作用更有利于紫外吸收， 故而产生了增色效应 增色效应 增色效应可以作为DNA变性的指标 不同来源DNA的变化不一，如大肠杆菌DNA经热变性后，其260nm的吸光度值可增加40%以上，其它不同来源的DNA溶液的增值范围大多在20－30%之间 变性温度 熔解温度（ melting temperature，Tm） 以加热为变性条件，使 DNA 分子双链解开50%所需温度 特点 爆发式：热变性是在变性温度范围内突发的跃变过程，很像结晶达到熔点时的熔化现象，故名熔解温度 狭窄性：变性温度范围很小 变性温度取决于DNA自身的性质 不同来源 DNA 间的 Tm 存在差别，在溶剂相同的前提下，这种差别主要是由DNA本身下列两方面的性质所造成的 DNA的均一性 DNA的（G+C）含量 DNA的均一性 有二种含义 DNA分子中碱基组成的均一性：如人工合成的只含有一种碱基对的多核苷酸片段，与天然 DNA比较，其Tm值范围就较窄。因前者变性时氢链断裂几乎可“齐同”进行 待测DNA样品组成的均一性：如样品中只含有一种病毒DNA，其 Tm 值范围较窄，若混有其它来源的DNA，则 Tm值范围较宽 DNA的（G+C）含量 在溶剂固定的前提下，Tm值的高低取决于DNA分子中的（G+C）的含量 （G+C）含量越高，G-C 碱基对越多，Tm 值越高。因G-C碱基对具有3对氢键，而A-T碱基对只有2对氢键，DNA中（G+C）含量高显然更能增强结构的稳定性，破坏 G-C间氢键需比A-T 氢键付出更多的能量，故（G+C）含量高的DNA，其变性Tm也高 DNA变性曲线 Tm 与（G+C）含量的关系 Tm 与DNA中（G+C）含量存在着密切相关性 Tm与（G+C）含量（X）百分数的这种关系可用以下经验公式表示（DNA溶于0.2mol/L NaCl中）:X%（G+C）=2.44（Tm-69.3） 核苷酸?20 Tm=4（G+C）+2（A+T） DNA的复性（renature） 指变性 DNA 在适当条件下，二条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象，它是变性的一种逆转过程 热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性，此过程称之为“ 退火”（a