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超薄切片样品的制备与观察 实验目的 掌握超薄切片样品的制备方法 及透射电镜样品的观察 超薄切片制样方框图 T 取材 *(Taking tissue) 电镜样品取材的注意事项： 1. 取材部位要准确，对一些复杂的器官取材应使用体式显微镜操作。 2. 操作应在低温（0 ~4oC）下进行，以免降低酶的活性。 3. 取材的体积要小，一般不超过1mm3。 4.动作要迅速，动物在离体以后一分钟内进入固定液。 5. 在样品解剖、分割时解剖器械要锋利，避免牵拉和挤压，机械损伤应最小。 固定(fixation) 固定的目的： 1. 保存细胞结构使其对生活状态的改变最小。 2. 在用固定剂固定以后的水洗、脱水及包埋 时保护标本使其内容物不被溶解及流失，并 使组织适当硬化，防止切片时变形。 固定剂总类： 甲醛、戊二醛、丙烯醛、四氧化锇、高锰酸 钾。 戊二醛（glutaraldehdye） 分子式：C5H8O2 ，分子量：100.12。 商品戊二醛一般为25%的水溶液，pH3.5~5.0。 氧气、高温、中性或碱性pH会使戊二醛发生聚合。戊二醛应存放在中等酸度，低温且黑暗的环境下保存。 戊二醛pH降至3.5以下就不要再继续使用。* 戊二醛是蛋白质的优良交联剂，并能和DNA反应。 戊二醛固定的细胞和细胞核