五制实验课小鼠脾脏单个核细胞分离.ppt

2013级五年制本科生免疫学实验课 小鼠脾脏单个核细胞的分离 实验内容 小鼠脾脏单个核细胞的分离（实验） 淋巴细胞分离及检测技术（讲解） 实验目的 掌握小鼠脾脏单个核细胞的分离及淋转的原理和方法 熟悉淋巴细胞的检测技术 细胞分离纯化的目的 测定细胞免疫功能首先要从人或动物外周血或组织中获取有活性的细胞，如淋巴细胞、巨噬细胞、粒细胞等。 根据实验目的不同，采用不同方法，主要需考虑(1)细胞纯度；(2)细胞获得量；(3)细胞活力； Ficoll密度梯度离心法 常用来分离单个核细胞的分层液：比重是 1.077左右的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)分层液。 红细胞、粒细胞比重大(1.092)，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重(1.070)，离心后漂浮于分层液的液面上，吸取分层液液面的细胞，就可从外周血/组织液中分离到单个核细胞。 本次课分离小鼠脾脏单个核细胞 Ficoll Ficoll密度梯度离心法 脾细胞悬液 培养液 实验材料 分组：两人一组， 每组一只小鼠 器材 数量 试剂及动物 数量 滴管 1支/2人 分层液 1ml/2人 EP管 3个/2人 PBS 1瓶/4人 计数板 1块/2人 计数液 1瓶/室 1ml加样器(tip) 1把/4人 RPMI1640（无血清） 100ml/室 20ul加样器(tip) 1把/4人 R