第二章工业发酵菌种选育.ppt

第二章　工业发酵菌种来源及选育 一、微生物工业对菌种的要求 微生物资源丰富，广布于土壤、水和空气等自然界中，其中土壤中最多。现在微生物工业用菌有的是野生型，有的是通过诱变得到的突变体。 发展趋势：　从野生型 　　 变异株 自然选育 　代谢控制育种 诱变育种 　基因工程定向育种 微生物工业对大规模生产用菌的要求原则： （1）所需培养基易得，价格低廉； （2）培养和发酵条件温和（糖浓度、温度、pH、溶解氧、渗透压等） （3）生长速度和反应速度较快，发酵周期短 （4）单产高 （选择野生型、营养缺陷型或调节突变株） （5）抗病毒能力强 （6）菌种纯粹，不易变异退化，稳定性好 （7）菌体不是病源菌，不产生任何有害的生物活性物质和毒素（包括抗生素、激素和毒素），保证安全 二、工业发酵微生物及其代谢产物 初级代谢产物是指微生物产生的，生长和繁殖所必需的物质，如蛋白质、核酸等。 次级代谢产物是指由微生物产生的，与微生物生长、繁殖无关的一类物质。 抗生素、色素、毒素等是与初级代谢产物(如氨基酸、核酸)相对产生的次级代谢产物。 2、微生物次级代谢与初级代谢的关系 许多抗生素的基本结构是由少数几种初级代谢产物构成的，所以次级代谢产物是以初级代谢产物为母体衍生出来的，次级代谢途径并不是独立的，而是与初级代谢途径有密切关系的。 糖代谢中间体，既可用来合成初级代谢产物，又可用来合成次级代谢产物，这种中间体叫做分支中间体。 微生物次级代谢，其目的产物的生物合成途径取决于微生物的培养条件和菌种的特异性。 三、工业上常用的微生物 微生物在工业上的用途很广，包括化工、医药、食品、水产、国防、纺织、石油勘探及石油化工等方面。 微生物的代谢产物多，已超过1300多种，而用于大规模工业生产的不足100多种；微生物酶有近千种，而工业上用的不过40－50种。微生物具有巨大的潜力可挖掘。 工业上常用菌种：细菌、放线菌、酵母菌、霉菌 2、酵母菌 种类：酒精酵母、啤酒酵母、假丝酵母 红酵母、面包酵母、毕赤氏酵母 应用：生产酒精、啤酒、石油发酵脱蜡和制取蛋白质、生产脂肪 面包酵母 3、霉菌 曲霉属 应用：生产有机酸、生产淀粉酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶 应用：酱油、酱类（淀粉酶） 米曲霉 应用：产糖化酶和蛋白酶、主要用于酿酒制曲和酱油制曲 毛 霉 应用：可以产生蛋白酶，我国多用于豆腐乳、豆豉等的制作 根霉 种类：米根霉、华根霉、少根根霉、爪哇根霉 应用：酿酒 青霉菌 4、放线菌 第二节、生产菌种的选育 二、菌种选育方法 （一）采样 1、采样对象 以采集土壤为主。一般园田土和耕作过的沼泽土中，以细菌和放线菌为主，富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多，如一些野果生长区和果园内。采样的对象也可以是植物，腐败物品，某些水域等。 （二）富集培养 富集培养：人为地增加分离概率，增加该菌种的数量，使目的微生物在种群中占优势。 方法：控制一定的养分（碳源或氮源）；控制一定的培养条件（温度、pH、底物等）。 培养条件控制 营养成分控制、控制培养基的pH、添加抑制剂、热处理、控制培养温度、控制通气量 （四）筛 选（生产能力的考察） 初筛：平板筛选法和摇瓶发酵筛选法。 复筛：采用与生产相近的培养基和培养条件，通过三角瓶的容量进行小型发酵试验，以求得适合于工业生产用菌种。 （六）微生物选择性分离的原理和方法 施加选择性压力分离法 1、控制营养和培养条件以利于待分离菌株的生长和抑制非目的微生物的生长； 2、根据目的微生物的生理特性或利用某些代谢产物生化反应来设计选择性培养基，通过观察微生物在选择培养基上生长状况或生化反应进行分离。 （3）抗生素或试剂；（P32） 酪素培养基和淀粉培养基 变色圈法：如果胶酶产生菌、谷氨酸生产菌等； 透明圈法：如淀粉酶生产菌、纤维素酶生产菌等； 生长圈法：工具菌是营养缺陷型菌株。 抑菌圈法：工具菌一般是抗生素敏感菌。 随机分离法(生物活性物质产生菌的分离）P19-21 抗生素产生菌的分离 高灵敏度的试验菌 抗肿瘤药物产生菌的分离 生化诱导分析法和SOS生色检测法 酶抑制剂产生菌的分离 选择与生理性或病理性相关酶 抗病毒药物产生菌的分离 生长因子产生菌的分离 营养缺陷型菌株为试验菌 免疫激活剂产生菌的分离 抑制细胞表面酶 多糖产生菌的分离 菌落较黏稠 2. 工业菌种育种的手段： 四、诱变育种 诱变育种的概念 以微生物的自然变异作为基础