化学发光第一部分教材.ppt

化学发光和生物发光 I 一、引言 公元前亚里士多德 真菌类和死鱼的发光 1668年，罗伯特.波义耳 BL需要氧参与 19世纪80年代末，Dubois命名荧光虫素酶和荧光虫素 1877年，Radziszewski发现洛汾碱的CL 1928年，Albrecht发现luminol的CL 1935年，光泽精的CL 1950年，商品化仪器出现 双(2,4-二硝基苯基)草酸酯-过氧化氢-红荧烯，发光总量子产率23%。为效率最高的化学发光反应。 溶解度小，不稳定，浓度猝灭效应强 高锰酸钾-亚硫酸盐体系发光机理 最佳pH=2.5 HSO3ˉ + MnO4 ˉ → HSO3 + MnO42 ˉ 2HSO3 →S2O62 ˉ +2H+ S2O62 ˉ → SO42 ˉ +SO2* HSO3ˉ为SO2水解生成，pH=2.5时比例最大 3 、 Ce(IV)直接氧化药物产生化学发光 利用此体系测定一系列药物，如奎宁、奎尼丁、辛可宁、萘普生、卡托普利、非那西汀、青霉胺、安乃近、VK3等。 12.2 鲁米诺电化学发光体系 在电极上所产生氧化性物质来氧化鲁米诺产生化学发光。在电极上施加一定的电压，从而使溶液中的溶解氧还原成H2O2，H2O2进一步反应产生一些具有强氧化性的氧自由基，这些活性氧与鲁米诺反应产生化学发光 鲁米诺直接接受电极通过的能量生成激发态或自由基离子，从而产生化学发光。 鲁米诺电化学发光体系在分析化学中应用主要分以下四类： （1）测定H2O2，或通过偶合反应测定生物活性物质，如葡萄糖、乳酸等。 （2）基于金属离子对鲁米诺电化学发光反应的催化作用，测定金属离子,，如Co2+、Cu2+、Ni2+。 （3）基于一些有机物对鲁米诺电化学发光体系的增敏或抑制作用测定这些有机物，如异烟肼、肾上腺素、没食子酸。 （4）利用不同的电极材料，测定鲁米诺或鲁米诺所标记的物质。 特点： 1. 高灵敏度和高选择性 2. 结合了两种方法的优点，克服各自的缺点 3. 从原理上说，所有能用电化学方法富集且能用CL检测的物质都可用此法测定。 电化学富集数据完善，CL检测体系很多。此方法有很好应用前景。 15、基于纳米材料的CL 纳米TiO2 乙醇，丙酮 纳米金催化化学发光 量子点 HgTe, H2O2, KMnO4 16、微波引发的金属增强化学发光 12.4电生试剂化学发光反应体系 13、荧光素（luciferine)-荧光素酶（luciferase-磷酸三腺苷（ATP）体系 检测食品中总菌数 腰鞭毛虫（Dinoflagellate）荧光素酶 含有三个结构域，每个都具有发光活性，底物为腰鞭毛虫荧光素，同时需要O2参与；该荧光素在中性pH条件下与一种特定的荧光素结合蛋白（LBP）结合并被持续氧化，当pH下降时荧光素与结合蛋白解离并与上述荧光素酶结合，因此改变pH可调控其发光强度变化 。 N C 水母素（Aequorin）及奥贝林（Obelin） 含腔肠素（Coelenterazine）过氧化物生色团，因此只需要Ca2+激活 14、NADPH：FMN氧化还原酶和细菌荧光素酶催化的发光反应 细菌荧光素酶（luciferase，LUX） 由两个对称的杂合二聚体构成，底物为FMNH2和醛 不同生物发光荧光素的结构及其中间产物和最终发光分子 不同生物发光荧光素的结构及其中间产物和最终发光分子 水母荧光素 细菌荧光素（FMNH2） 腰鞭毛虫荧光素 萤火虫荧光素 发光分子 发光分子 发光分子 发光分子 长链醛 Anal. Chem. 2002, 74, 120-124 2.过氧化草酸酯类反应体系 典型过氧化草酸酯分子结构式 双(2,4,6-三氯苯基)草酸盐 过氧化草酸酯体系发光机理 TCPO-CL在药物分析中的应用 3.光泽精化学发光反应体系 光泽精化学发光反应 光泽精的分子结构式 22 23 24 * h? 4. 吖啶酯类化学发光反应体系 5、1,2-二氧杂环丁烷类化学发光体系 6、酸性高锰酸钾化学发光体系 高锰酸钾-吗啡 高锰酸钾-连二亚硫酸钠体系 KMnO4(H+)-甲氧苄啶-硫代硫酸钠化学发光反应体系 KMnO4(H+)-EC-RNA化学发光体系 高锰酸钾-草酸 高锰酸钾－TCs CL体系测定盐酸四环素、盐酸土霉素 高锰酸钾 CL体系的应用 过氧化氢－药物氧化还原化学发光体系测定核黄素、VB1、四环素、土霉素、金霉素等 7. 过氧化氢直接氧化化学发光体系 8. Ce(IV)化学发光反应体系 Ce(IV)－SO32-体系 Ce(IV)－Ru(bpy)32+ CL体系 Ce(IV)直接氧化药物产生化学发光 1 、 Ce(IV)－SO32－体系 喹诺酮类化合物（氧氟沙