第4章酶分子修饰.pptVIP

精氨酸、精氨酸酶 能治疗血液中的氨转变为尿素而排除，对高氨血、肝脏功能障碍等疾病颇有疗效。 能杀死肿瘤细胞或细菌等靶细胞。 L－天冬酰氨酶 是酰胺基水解酶。 ⑴是一个广泛应用于儿童极性淋巴细胞白血病（ALL）治疗的酶类药物。 ⑵也用于霍金森病、淋巴瘤、黑素肉瘤和胰腺瘤等疾病。 胰蛋白酶原的激活 紫外－可见光谱仪 荧光光谱仪 圆二色光谱仪（CD） 课后作业 1、酶分子修饰的概念，原理和意义 2、掌握金属离子置换修饰的过程 3、掌握大分子结合修饰的过程 4、如何运用酶分子修饰技术解决实际问题？ 利用所学酶分子修饰技术，试设计提高SOD酶稳定性的工业流程？ 利用所学的知识，试设计提高α-淀粉酶催化反应活性的工艺流程？ 特点：溶解度高，通常没有抗原性，也没有毒性；生物相容性好等特点。分子末端具有两个可以被活化的羟基，可以通过甲氧基将其中一个羟基屏蔽起来，成为只有一个可被活化羟基的单甲氧基聚乙二醇（MPEG）。 （一）、氨基修饰 采用某些化合物使酶分子侧链上的氨基（－NH2)发生改变，从而改变酶蛋白的空间构象的方法称为氨基修饰。 氨基修饰剂主要有：亚硝酸、2，4－二硝基氟苯（DNFB）、丹磺酰氯（DNS）、2，4，6－三硝基苯磺酸（TNBS）、醋酸酐、琥珀酸酐、二硫化碳、乙亚胺甲酯、O－甲基异脲、顺丁烯二酸酐等。 这些氨基修饰剂作用于酶分子侧链上的氨基，可以产生脱氨基作用或与氨基共价结合将氨基屏蔽起来。 （二）、羧基修饰 采用各种羧基修饰剂与酶蛋白侧链的羧基进行酯化、酰基化等反应，使蛋白质的空间构象发生改变的方法称为羧基修饰。 所使用的羧基修饰剂有：碳化二亚胺、重氮基乙酸盐、乙醇－烟酸试剂、异噁唑盐等。 其中碳二亚胺是酶分子羧基修饰最普遍采用的修饰剂。用此修饰法可以定量测定酶分子中羧基的数目。 （三）、巯基修饰 采用巯基修饰剂与酶蛋白侧链上的巯基结合，使巯基发生改变，从而改变酶的空间构象、特性和功能的修饰方法称为巯基修饰。 常用的巯基修饰剂有酰化剂、烷基化剂、马来酰亚胺、二硫苏糖醇、巯基乙醇、硫代硫酸盐、硼氢化钠。 其中烷基化试剂（如碘乙酸等）是一种重要的巯基修饰剂，经过烷基化修饰的酶分子相当稳定，而且通过荧光检测系统300nm很容易检测其修饰结果。 （四）、胍基修饰 采用二羰基化合物与胍基反应生成稳定的杂环，从而改变酶分子的空间构象的方法称为胍基修饰。 用作胍基修饰剂的二羰基化合物主要有：丁二酮、丙二醛、苯乙二醛等。它们可以在中性或者弱碱性的条件下与精氨酸残基上的胍基反应，生成稳定的杂环类化合物。 （五）、酚基修饰 通过修饰剂的作用使酶分子上的酚基发生改变，从而改变酶蛋白的空间构象和特性的修饰方法称为酚基修饰。 酚基的修饰包括酚羟基的修饰和苯环上的取代修饰。一般取代基上羟基修饰后的产物稳定性更好。 酚基修饰的方法主要有碘化法、硝化法、琥珀酰化法等。 （六）、咪唑基修饰 通过修饰剂与咪唑基反应，使酶分子中的组氨酸残基发生改变，从而改变酶分子的构象和特性的修饰方法称为咪唑基修饰。 常用的咪唑基修饰剂有碘乙酸、焦碳酸二乙酯等。 其中焦碳酸二乙酯（DEPC）在近中性的条件下对组氨酸残基上的咪唑基具有较好的特异修饰能力，而且修饰产物在240nm波长处有最大吸收峰。可以通过修饰得知分子中咪唑基的数量。 （七）、吲哚基修饰 通过改变酶分子上的吲哚基而使酶分子的构象和特性发生改变的修饰方法称为吲哚基修饰。 修饰剂： N－溴代琥珀酰亚胺（NBS）、 2－羟基－5－硝基苄溴（HNBB）和4－硝基苯硫氯。 （八）、分子内交联修饰 含有双功能基团的化合物（又称为双功能试剂）如戊二醛、已二胺、葡聚糖二乙醛等，可以在酶蛋白分子中相距较近的两个侧链基团之间形成共价交联，从而提高酶的稳定性的修饰方法称为分子内交联修饰。 通过分子内交联修饰，可以使酶分子的空间构象更为稳定，从而提高酶分子的稳定性。 例如：采用葡聚糖二乙醛对青霉素酰化酶进行分子内交联修饰，可以使该酶在55℃条件下的半衰期延长9倍，而其最大反应速度Km不改变。 酶分子侧链修饰的意义 了解溶液状态下的酶分子的构象 研究某种基团在酶分子中的作用 测定某一种基团在酶分子中的数量 提高酶的活力、增加酶的稳定性、降低酶的抗原性 获得新的酶种 1.可定量测定酶分子中羧基的修饰剂为（） 2.可定量测定酶分子中咪唑基的修饰剂为（） A.碳二