siRNA和miRNA简介教学文稿.pptVIP

;20世纪50年代中期，人类发现生命的遗传物质是DNA双螺旋。这之后过了十多年，人们才发现了RNA，它们是联系DNA和蛋白质的“桥梁”，是细胞里的信使（信使RNA）、运输工具（转运RNA）和“车床”（核糖体RNA）上的关键零件，因此它们看起来好像一直在默默地干着一些替DNA跑腿的杂活。长久以来，生物学家们从来没有认为RNA会是生命中最重要的一份子。?越来越多的证据清楚的表明，RNA在生命的进程中扮演的角色远比我们早前设想的更为重要。 ? ; RNA的分类; 小RNA分子本身又包含了若干类RNA，根据小 RNA 的生成、结构和功能大约可分为以下几类： ;小干扰RNA（small interfering RNA; siRNA） 和微小RNA（microRNA；miRNA）是两种序列特异性地转录后基因表达的调节因子，是小RNA的最主要组成部分，它们的相关性密切，既具有相似性，又具有差异性。对小RNA的深入研究将使我们更深一步了解生命的奥秘。 ;概 念： RNA interference（RNAi） 与靶基因序列同源的双链RNA所诱导一种序列特异性的转录后基因沉默现象。;RNAi 发现历程： 1990年，曾有科学家给矮牵牛花插入一种催生红色素的基因，希望能够让花朵更鲜艳。但意想不到的事发生了：矮牵牛花完全褪色，花瓣变成了白色！;1995年 康奈尔大学 Guo等在对线虫C.elegans的研究中，应用正义链RNA作为对照，研究par-1基因的表达，意外的发现，正义链RNA与反义链RNA同样能够抑制目的基因的表达。 ;1998年，Andrew Fire等首次将正义链反义链RNA混合注入线虫C.elegans中，观察到更强的基因表达抑制。首次提出了RNA interference的概念。 ;RNAi机制 ;;;RISC: RNA-Induced Silencing Complex;RNAi 的生物学意义： 一种古老、保守而又极其重要的遗传学行为。生物体在长期的进化过程中对异常基因活动的监控和防御,有学者称之为“基因组水平的免疫系统”。 一种抗病毒感染机制。;miRNA的研究起始于时序调控小RNA（stRNAs）。1993年，Lee等在秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegan）中发现了第一个可时序调控胚胎后期发育的基因lin-4。2002年，Reinhart等又在线虫C.elegan中发现第二个异时性开关基因let-7。2001年10月《science》报道了三个实验室从线虫、果蝇和人体克隆的几十个类似C.elegan的lin-4的小RNA基因，称为microRNA。随后多个研究小组在包括人类、果蝇、植物等多种生物物种中鉴别出数百个miRNAs。对一部分miRNAs的研究分析提示：miRNAs参与生命过程中一系列的重要进程，包括发育进程，造血过程，器官形成，凋亡，细胞增殖，甚至是肿瘤发生 。;What are microRNAs？（1）;What are microRNAs？（2）;miRNA的成熟;Pre-miRNA;;miRNA与靶mRNA的作用模式：;miRNA的调控特点;miRNA调节方式的优点;microRNA基因组分布;植物与动物miRNA的区别;经典理论：;?;由于RNA 病毒入侵、转座子转录、基因组中反向重复序列转录等原因,细胞中出现了dsRNA（注：病毒入侵，或者是自身合成RNA中出现错误，细胞内就会产生双链RNA，来阻止这些异常基因的表达）。Rde-1(RNAi缺陷基因-1)编码的蛋白质识别外源dsRNA，当dsRNA达到一定量的时候，Rde-1引导dsRNA与Rde-1编码的Dicer酶（Dicer是一种RNaseIII 活性核酸内切酶）结合，形成酶-dsRNA复合体。;在Dicer酶的作用下，这些双链RNA被加工成20-25nt的siRNA ，而后这些siRNA被组装进入一种RNA诱导的沉默复合体（RNA-induced??silencing complex，RISC，由核酸内切酶、核酸外切酶、解旋酶等构成，作用是对靶mRNA进行识别和切割）。最后，这些siRNA与靶mRNA分子互补配对，并引导RISC剪切、降解RNA分子。 因此说siRNA只降解与其序列互补配对的mRNA。其调控的机制是通过互补配对而沉默相应靶位基因的表达，所以是一种典型的负调控机制。 ;小干扰RNA（small interfering RNA; siRNA） 和微小RNA的异同点;miRNA与siRNA的作用机制：;miRNA与siRNA的区别：;相同点/联系点;不同点/分歧点;生物合成，成熟过程;互补性（complementarity