细胞工程四体细胞胚及人工种子.pptVIP

第四章 体细胞胚及人工种子 （2）外源激素与体细胞胚发生 ① 2，4-D与体细胞胚发生 2，4-D是诱导多种植物离体培养体细胞转变为胚性细胞的重要激素。 单子叶植物和双子叶植物诱导体细胞胚胎发生时，所要求的2,4-D的浓度不同，对单子叶植物而言，一般要求较高浓度的2,4-D，其浓度范围为0.5-5mg/L，通常使用浓度为2mg/L； 而对双子叶植物而言，一般要求较低浓度的2,4-D，其浓度范围为0.02-1mg/L，通常使用的浓度为0.1mg/L。 在体细胞胚胎发生的诱导阶段，培养基中必需添加2,4-D，而在体细胞胚胎形成阶段，要降低培养基中2,4-D的浓度或去除2,4-D，以保证体细胞胚的正常生长。 在胡萝卜细胞培养中，加入2，4-D后诱导一些特异性多肽或蛋白质形成，当去除生长素后，这些多肽和蛋白质也随之消失。但在诱导出胚性细胞后，及时除去培养基中的2，4-D，胚性细胞在进一步分化和发育的同时释放糖蛋白GP65（65kDa） 表 在MS固体培养基上不同浓度2,4-D对木豆幼苗叶片外植体诱导和原胚细胞形成的影响 2,4-D(μM) Callus induction(%) Proembryonic cell*(%) 0.00 0.0 0.0 2.26 3.2d 3.4d 4.52 7.4c 10.2c 6.78 38.6a 37.4a 9.04 18.2b 12.8b 11.30 3.6c 2.2c 表 在具有不同浓度2,4-D的MS液体培养基上木豆不同时期体细胞胚诱导率 2,4-D(μM) 收集细胞的体积 (10th day) 体细胞胚发育时期 球形胚(%) 心形胚(%) 鱼雷胚(%) 0.00 0 0 0 0 1.12 2.8e 2.4e 1.8e 1.2e 2.26 3.2d 7.6d 2.4d 1.6d 3.38 4.6c 20.2b 8.2b 5.2b 4.52 5.2b 36.2a 20.4a 16.4a 5.64 5.6b 18.6c 6.6c 3.6c 6.78 6.2a 7.4d 1.6e 1.2e Origin of embryoids in embryo-derived callus culture. (a) Single cells (arrow) and two-celled stage (double arrows). x137. (b)Four-celled stage (arrowhead). x137. (c) Multicelled proembryo containing eight to ten cells. x137 (d) Epidermized lobular stage. x34. (e) Heart shape embryoid that remain in the callus. X34. (f) Several compact embryoids in different stages of formation. x14. A,C,E为离体培养6周后的体细胞胚；B,D,F为离体培养5个月后形成的体细胞胚 A:品种GK7 ，在添加83.0 mM centrophenoxine培养基上; B: 品种AT120，在添加124.4 mM centrophenoxine培养基上; C: 品种59-4144，在添加12.4 mM dicamba培养基上; D:品种AT120，在添加83.0 mM dicamba培养基上; E: 品种VC1，在添加83.0 mM picloram培养基上; and F:品种VC1，在添加124.4 mM picloram培养基上. 图 含不同种类和不同浓度生长素固体培养基上成熟花生胚轴体细胞胚诱导 ② 其它生长激素与体细胞胚发生 除2,4-D外，ABA对植物体细胞胚的发生也起到重要的调控作用。 研究表明，ABA具有促进苈蒿体细胞胚结构正常化的显著效应。 在浓度适宜时，ABA能抑制多种异常体细胞胚的发生，而且ABA加入培养基的时间愈早其效应也越明显。 较低浓度的ABA对保持籼稻愈伤组织的胚性结构具有重要意义，可明显提高这种胚性愈伤组织分化出苗率。 在拐芹中ABA与NAA共同作用可诱导一些游离氨基酸含量的变化和特异蛋白的形成。 ABA和PEG对胡萝卜(Daucus carota L.)体细胞胚发生具有调控作用 大量的研究表明，ABA对某些植物体细胞胚胎发生特异性基因的表达起调控作用，