第13章RNA生物合成11采用.pptVIP

第一节 原核生物转录的模板和RNA聚合酶 模板链：反意义链（antisense strand ）—— 以该链中的DNA碱基顺序指导RNA的合成即被转录的那条DNA链。 5’-----GCAGTACATGTC-----3’编码链 DNA 3’-----c g t c a t g t a c a g-----5’模板链 5’-----GCAGUACAUGUC-----3’ RNA N ------Ala--Val--His--Val------C 蛋白质 DNA聚合酶在启动DNA链延长时需要引物存在，而RNA聚合酶不需要引物就能直接启动RNA链的延长。 RNA聚合酶和DNA的特殊序列——启动子(promoter)结合后，就能启动RNA合成。 原核生物（E.coli）RNA聚合酶 1、 有4种(5个)亚基 α、β、β’、σ 亚基 α2 β β’ σ 全 酶 核 心 酶 三、RNA聚合酶结合到DNA的启动子上起动转录 转录是不连续、分区段进行的。 每一转录区段可视为一个转录单位，称为操纵子(operon)。操纵子包括若干个结构基因及其上游(upstream)的调控序列。 调控序列中的启动子是RNA聚合酶结合模板DNA的部位，也是控制转录的关键部位。原核生物以RNA聚合酶全酶结合到DNA的启动子上而起动转录，其中由σ亚基辨认启动子，其他亚基相互配合。 对启动子的研究，常采用一种巧妙的方法即RNA聚合酶保护法。 第一个磷酸二酯键生成后，σ亚基即从转录起始复合物上脱落，核心酶连同四磷酸二核苷酸，继续结合于DNA模板上，酶沿DNA链前移，进入延长阶段。 RNA-pol的移动 1、RNA聚合酶（核心酶） 与DNA模板紧密结合，沿3’→5’方向移动 解旋作用：DNA解开17 bp（拓扑异构酶） 聚合功能：NTP不断聚合（形成磷酸二酯键 ） RNA链不断延长。 （不具外切酶功能） 2、杂交螺旋 RNA-DNA形成12bp长的杂交螺旋 转录产物RNA沿5’→3’方向脱落、延长 RNA延长速度：40个核苷酸/秒/每分子酶 DNA双螺旋随后渐渐恢复（拓扑异构酶） 依赖Rho 因子的转录终止 非依赖Rho因子的转录终止 ρ因子是由相同亚基组成的六聚体蛋白质，亚基分子量46kD。 ρ因子能结合RNA，又以对poly C的结合力最强。 ρ因子还有ATP酶活性和解螺旋酶(helicase)的活性。 目前认为，ρ因子终止转录的作用是：与RNA转录产物结合，结合后ρ因子和RNA聚合酶都可发生构象变化，从而使RNA聚合酶停顿，解螺旋酶的活性使DNA/RNA杂化双链拆离，利于产物从转录复合物中释放 。 第三节 真核生物的转录过程 真核生物的转录过程比原核复杂。二者的转录起始过程有较大区别，转录终止也不相同。 一、真核生物RNA聚合酶（三种） 类型 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 二、转录因子（真核生物） 类型 Ⅰ型转录因子 （TFⅠ ） Ⅱ型转录因子 （TF Ⅱ ） Ⅲ型转录因子 （TF Ⅲ ） 真核生物的转录起始上游区段比原核生物多样化 启动子（promoter）：是DNA上的特殊的序列，其中最重要的保守顺序称TATA (box)盒子，是RNA聚合酶结合部位 转录起始时，RNA-pol不直接结合模板启动子区需要转录因子先与启动子区结合，从而刺激转录。 帽子结构 ?修饰包括mRNA分子核糖上2’-羟基的甲基化反应和嘌呤碱的甲基化反应。（胞浆和核内） 编辑（editing）是指在转录后对mRNA序列中的碱基进行变换的过程 rRNA前体的转换 真核细胞的5S RNA基因与其他rRNA基因相分开 ，分别有 polⅢ和 polⅠ转录生成。 28S、5.8S与相关的蛋白质一起组成核糖体的大亚基。18S则是小亚基的成分。 加工方式：剪接、修饰。 甲基化——碱基的甲基化修饰和部分核糖的2’-OH甲基化反应 剪接接口： 5’ GU…AG-OH3’ 并接体:snRNP（U1 SnRNA, U2 SnRNA）与hnRNA内含子碱基互补结合于5’ ，3’端→套索→二次转酯反应切下内含子 第一次转酯反应 第二次转酯反应 二次转酯反应 pG-OH (ppG-OH, pppG-OH) U-OH GpU pGpA 第一次转酯反应 第二次转酯反应 UpA GpU 外显子1 内含子 外显子2 G-OH UpU pGpA 剪接过程的二次转酯反应 (twice transesterification) 鸡卵清蛋白基因 hnRNA 首、尾修饰 hnRNA剪接 成熟的mRNA 鸡卵清蛋白基因