2019届高考生物基因工程讲座讲义.ppt

基因工程专题复习 基因工程是狭义的遗传工程，但广义的遗传工程泛指把一种生物的遗传物质（细胞核、染色体脱氧核糖核酸等）移到另一种生物的细胞中去，并使这种遗传物质所带的遗传信息在受体细胞中表达。基因工程的核心是构建重组DNA分子，因此，早期也将基因工程称为重组DNA技术。 一、限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶是能够识别和切割DNA分子内一小段特殊 核苷酸序列的酶。（一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸 序列，并在特定的切点上切割DNA分子。） EcoRI —G AATTC— —CTTAA G— —A AGCTT— —TTCGA A— 。 限制性核酸内切酶 连接的部位 磷酸二酯键 而不是氢键 结果 两个DNA相同的黏性末端连接起来。 作用: 将外源基因送入受体细胞。 常用的:1.质粒 2.噬菌体 3.动植物病毒等 “分子运输车”——载体，应具备以下条件： （1）必须有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上； （2）载体必须具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制； （3）必须带有标记基因，以便进行重组后的筛选； （4）必须是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去； （5）大小应合适，太大则不易操作。 质粒与宿主细胞的关系 质粒的存在对宿主细胞无影响， 质粒的复制只能在宿主细胞内完成 构建基因文库的基本程序 1)提取研究对象基因组DNA，制备合适大小的DNA片段，或提取组织或器官的mRNA并反转录成cDNA； 2) DNA片段或cDNA片段与经特殊处理的载体连接形成重组DNA； 3)重组DNA转化宿主细胞或体外包装后侵染受体菌； 4)阳性重组菌落或噬菌斑的筛选。 基因组文库的类型 根据所选用的载体可以分为： 质粒文库、噬菌体文库、人工染色体文库（细菌人工染色体文库、酵母人工染色体文库）。 从基因文库中筛选目的基因 1.通过克隆序列筛选：核酸杂交和PCR 2.通过表达产物筛选：免疫学检测（抗原抗体反应） 基因表达载体的构建——核心 基因表达载体的构建——核心 基因表达载体的组成： 目的基因+启动子+终止子+标记基因 2、基因表达载体的构建——核心 作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？ 不可以。因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还要有启动子、终止子和标记基因等。必须构建上述元件的主要理由是： （1） 生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能比较有利于基因的表达 （2） 通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体生物中无法转录； （3） 目的基因是否导入受体生物中需要有筛选标记； 3、将目的基因导入受体细胞 方法： 将目的基因导入植物细胞： 农杆菌转化法（双子叶植物和祼子植物）、基因枪法（单子叶植物）、花粉管通道法 将目的基因导入动物细胞 显微注射法 将目的基因导入微生物细胞 感受态细胞 将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法 DNA分子杂交技术 分子探针：核酸分子探针是指特定的已知核酸片段（目的基因片段），能与互补核酸序列退火杂交，用于对待测核酸样品中特定基因顺序的探测。 满足条件： （1）必须是单链； （2）带有容易被检测出来的标记物（如放射性同位素标记）。 核酸分子杂交实质上是用已知序列的DNA或RNA片段作为探针与待测样品的DNA或RNA序列进行核酸分子杂交。 DNA分子杂交示意图 用DNA分子杂交技术可鉴定两个物种之间的亲缘关系的远近。将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。如果杂合部位多，则亲缘关系近，反之则远。 4、目的基因的检测与鉴定 鉴定：（个体水平） 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 4、目的基因的检测与鉴定 将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。 生物芯片 从正常人的基因组中分离出DNA与DNA芯片杂交就可以得出标准图谱。从病人的基因组中分离出DNA与DNA芯片杂交就可以得出病变图谱。 通过比较、分析这两种图谱，就可以得出病变的DNA信息。 基因芯片诊断技术