生物大分子核酸化学特性结构和功能.ppt

ncRNA 功能 参与转录调控、RNA的剪切和修饰、mRNA的稳定和翻译调控、蛋白质的稳定和转运、染色体的形成和结构稳定等细胞重要功能 lncRNA 功能 lncRNA在结构上类似于mRNA，但序列中不存在开放读框。许多已知的lncRNAs由RNA聚合酶Ⅱ转录并经可变剪切形成，通常被多聚腺苷酸化。lncRNA具有复杂的生物学功能，并与一些疾病的发病机制密切相关。有的lncRNA能使基因沉默，有的则激活基因的表达。 核内小RNA 核仁小RNA 胞质小RNA 催化性小RNA 小干涉 RNA 微小 RNA 短链非编码RNA亦称为非编码小RNA（small non-messenger RNA） 核内小RNA（small nuclear RNA, snRNA）位于细胞核内。snRNA有5种，分别称为U1、U2、U4、U5、U6，它们与多种蛋白形成复合体，参与真核细胞hnRNA的内含子加工剪接（第十六章）。 核仁小RNA（small nucleolar RNA, snoRNA）：定位于核仁，主要参与rRNA的加工和修饰，如rRNA中核糖C-2?的甲基化修饰。 胞质小RNA（small cytoplasmic RNA, scRNA）：存在于细胞质中，参与形成信号识别颗粒，引导含有信号肽的蛋白质进入内质网定位合成（第十七章）。 催化性小RNA亦被称为核酶（ribozyme）。是细胞内具有催化功能的一类小分子RNA，具有催化特定RNA降解的活性，在RNA的剪接修饰中具有重要作用。 小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）是生物宿主对于外源侵入基因表达的双链RNA进行切割所产生的具有特定长度（21～23 bp）和特定序列的小片段RNA。这些siRNA可以单链形式与外源基因表达的mRNA相结合，并诱导相应mRNA降解。 微小RNA（microRNAs, miRNAs ） 是一类长度为22nt左右的内源性sncRNA。miRNAs主要是通过结合mRNA而选择性调控基因的表达。 核酸的理化性质 第四节 核酸在波长 260nm 处有强烈的吸收，是由碱基的共轭双键所决定的。这一特性常用作核酸的定性和定量分析。 一、核酸分子具有强烈的紫外吸收 碱基的紫外吸收光谱 DNA或RNA的定量 A260 = 1.0 相当于 50μg/ml 双链DNA(dsDNA) 40μg/ml 单链DNA (ssDNA or RNA) 20μg/ml 寡核苷酸 确定样品中核酸的纯度 纯 DNA: A260/A280 = 1.8 纯 RNA: A260/A280 = 2.0 紫外吸收的应用 二、DNA变性是双链解离为单链的过程 某些理化因素导致DNA双链互补碱基对之间的氢键发生断裂，DNA双链解离为单链的过程。 定义 DNA变性的本质是双链间氢键的断裂。 DNA的变性 部分变性DNA的电镜图像 增色效应(hyperchromic effect)：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 DNA解链时的紫外吸收变化 DNA的解链曲线 连续加热DNA的过程中以温度相对于A260值作图，所得的曲线称为解链曲线。 解链过程中，紫外吸光度的变化达到最大变化值的一半时所对应的温度。 解链温度(melting temperature，Tm) G+C 含量越高，解链温度就越高。 解链曲线的变化 三、变性的核酸可以复性或形成杂交双链 当变性条件缓慢地除去后，两条解离的互补链可重新配对，恢复原来的双螺旋结构，这一现象称为DNA复性(renaturation) 。 减色效应：DNA复性时，其溶液OD260降低。 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为退火(annealing) 。 不同种类的DNA单链分子或RNA分子放在同一溶液中，只要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系，在适宜的条件可以在不同的分子间形成杂化双链(heteroduplex)。 这种杂化双链可以在不同的DNA与DNA之间形成，也可以在DNA和RNA分子间或者RNA与RNA分子间形成。这种现象称为核酸分子杂交。 核酸分子杂交(hybridization) 核酸分子复性和杂交 研究DNA分子中某一种基因的位置。 鉴定两种核酸分子间的序列相似性。 检测靶基因在待检样品中存在与否。 核酸分子杂交的应用 一、掌握 1. 核酸的结构与功能 1）DNA的二级结构B型双螺旋模型的结构特点 2）核小体的结构一般特点 3）端粒的结构特点和功能 4）RNA的分子结构的特点 5）tRNA的结构：一级和二级结构特点 6）真核生物mRNA的内含子、外显子、hnRNA、5’ 端“帽子”结构、3’端多聚腺苷酸 “尾”等的结构和功能 2. 核酸的理化性质 1）核酸的变性、复性和杂